细胞复苏及冷冻.docVIP

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细胞复苏及冷冻

细胞培养基及冻存液的配制 细胞培养基的配制: 注意事项:为了避免不小心污染造成的浪费,一般用50ml管分装配制。 配置比例:45ml 培养基(90%的总体积比例)+ 5ml FBS(血清,10%的总体积比例)+ 500μL 双抗(1:100的比例) 双抗:链霉素+青霉素——抑制细菌生长。 细胞冻存液的配制: 配置比例:5mlDMSO(100%纯度,以10%总体积的比例)+ 45ml已配好的培养基(90%的总体积比例) 注意事项:刚配好的细胞冻存液会发热,需用封口膜封住瓶盖后(防止细菌污染)放入冰箱冷冻后再使用。过热的冻存液会使得细胞死亡?? 冻存液一般提前一天配好即可,放置太久会 DMSO二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide):是一种渗透性保护剂,能够降低细胞冰点,减少冰晶的形成,减轻自由基对细胞损害,因其抗冻作用,可用于细胞的冻存;1、、、、、、、、8.1、8.2、、、、、、1、、离心min。 3、、、、、细胞复苏的原则快速融化必须将冻存在-196液氮中的细胞快速融化至37,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。

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