丹参注射液对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠转化生长因子β1的影响论文.docVIP

　　丹参注射液对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠转化生长因子β1的影响论文 .freelRNA表达模型组最强,与空白组、丹参组比较差异有统计学意义(P 0.05)；丹参组与空白组比较差异无统计学意义(P 0.05)。结论 TGF-β1参与了COPD气道重塑的发病过程,丹参注射液可以通过下调TGF-β1干预COPD气道重塑。 【关键词】 丹参注射液；慢性阻塞性肺疾病；气道重塑；转化生长因子β1；大鼠 Key odeling；transforming groonary disease,.freelRNA表达的变化,探讨丹参注射液对COPD发生、发展的干预作用,寻求防治COPD、延缓气流受限进展的有效途径。 1 材料与方法 1.1 动物及分组 清洁级雄性SD大鼠45只(广州中医药大学动物中心提供,合格证号：0004804),体重120～150 g。随机分为正常对照组、模型组、丹参组,每组15只。 1.2 慢性阻塞性肺疾病大鼠模型制备方法 参照李氏等1报道的烟熏加气道内灌注细胞内毒素方法复制COPD大鼠模型。分别于实验第33、47日经气管注入细胞内毒素,除注细胞内毒素日外连续熏香烟,共102 d。 气道内细胞内毒素灌注方法：用乙醚麻醉大鼠,将其固定在木板上,腹部向上,用剪刀和镊子剥开气管前的皮毛层、肌肉层,暴露气管,用注射器直接向气管内注入细胞内毒素,逐层缝合。 烟熏方法：第1－102日(第33、47日除外)将大鼠置入自制吸烟箱,规格为40 cm×40 cm×25 cm,每次放6只,注入红双喜香烟烟雾,每次4根香烟,辅以雾化吸入,每次2 h,每日2次,每周5 d,共102 d。 1.3 给药 丹参组于造模的同日开始每天吸烟前腹腔注射丹参注射液(正大青春宝药业有限公司,批号0405202)2 mL/kg,连续102 d,每周根据体重调整丹参剂量。正常对照组与模型组不给药。各组均于第103日取材。 1.4 检测指标与方法 1.4.1 血清转化生长因子β1含量测定 取静脉血2 mL,用ELISA检测试剂盒测定血清TGF-β1水平。按检测药盒说明书进行加样和显色,以Bio-Rad公司550型酶标仪OD值,按标准曲线计算TGF-β1含量。 测定方法：BIOSOURCE多种族TGF-β1是一种固相夹心法。对TGF-β1特异性的单克隆抗体包被到酶标板上,标准品和样品中的TGF-β1与单克隆抗体结合,加入生物素化的抗大鼠TGF-β1抗体,形成免疫复合物连接于板上,链霉素-过氧化物酶也被加入其中。再加底物液,底物液可与酶结合产生颜色,颜色的浓度可直接反映样品中的TGF-β1的含量。加终止液,在492 nm处测OD值,TGF-β1的浓度与OD值成正比。 1.4.2 肺组织匀浆转化生长因子β1含量测定 称取500 mg肺组织,加入生理盐水1.0 mL,组织匀浆器充分研磨,5 000 r/min离心10 min,取上清0.1 mL,加生理盐水至1.0 mL,充分混匀后,5 000 r/min离心10 min,取上清液备测。检测方法同血清TGF-β1含量测定。 1.4.3 转化生长因子β1在肺组织内的表达 采用免疫组织化学染色法。肺组织标本经4%多聚甲醛灌注内固定后,取材放入4%多聚甲醛固定24 h,石蜡包埋切片,免疫组织化学染色参照试剂盒推荐的链酶抗生物素蛋白-过氧化酶(SP)法进行操作。每组切片任选1张用PBS液代替一抗进行染色,为阴性对照。TGF-β1多克隆抗体1∶50稀释,阳性表达为细胞胞浆呈棕黄色颗粒状改变。切片结果采用亿鸣公司病理图像分析仪进行图像分析。表达强度用平均吸光度表示(A)：对每张切片阳性细胞的强度DAB显色按无着色、淡黄色、棕黄色和棕褐色分别计0、1、2、3分,着色阳性面积按无着色及着色 1/3、1/3～2/3、 2/3分别计分为0、1、2、3分,然后根据两项计数之和判断其结果： 3分为阴性,≥3分为阳性,其中3～4分为低表达,5～6分为高表达。 1.5 统计学方法 应用SPSS11.0统计软件包建数据库,计量资料以x±s表示,各组之间比较用单因素方差分析(方差不齐采用秩和检验),检验水平α＝0.05。 2 结果 (见表1～表3)表1 各组血清TGF-β1值比较(略) 表2 各组肺组织匀浆TGF-β1值比较(略)表3 各组肺组织中TGF-β1 mRNA的表达强度比较(略)注：与丹参组、正常对照组比较,P 0.05 3 讨论 不完全可逆并呈进行性进展的气流受限是COPD的主要特点,气道重塑是导致不可逆性因素气流受限的重要因素。气道重塑主要表现为平滑肌细胞增殖及细胞外基质沉积,前者包括平滑肌细胞增生和肥大,后者包括成纤维细胞增生、胶原及氨基聚糖沉积。多种介质参与了COPD气道重塑的发生、发展。TG