疾病第五章神经69节.ppt

130 [结果] 模型组大鼠在腹腔注射海人酸后10~20 min, 进入潜伏期，大鼠由自由活动状态逐渐转为安静或伏卧，随后出现眼神呆滞，头面部肌群稍有轻微颤动。然后进入小发作期，出现湿狗样抖动，同时伴有眨眼、抖耳和搔抓动作。 继而逐渐进入大发作期，重者表现为全身肌肉强烈抽动，尖叫，口角流涎，四肢僵直或突然跳跃，直立，翻滚，摔倒，发作持续约2~5min。然后，自行恢复，随后又发作。对照组大鼠则无上述癫痫发作行为。 显著的病理改变特点是海马CA3区神经元死亡。目前认为，神经元死亡可能与钙超载、锌毒性及细胞凋亡有关。 [模型评价] 1.该模型建立简便、经济适用，易于推广。 2.本模型为剂量依赖性，海人酸剂量越大，致痫作用越显著，但动物死亡率越大。海人酸可采用皮下、静脉或腹腔内注射的方式给药，剂量为4~12mg/kg体重，一般采用海人酸10mg/kg体重腹腔注射或皮下注射。也有研究提示，腹腔注射海人酸6mg/kg体重，即能达到理想的结果，动物死亡率低。 [注意事项] 1.大鼠对海人酸的反应存在种属和个体的差异，Wistar大鼠对海人酸的敏感性要强于SD大鼠；老龄大鼠比年轻的大鼠敏感。 2.全身性给予惊厥剂量的海人酸可诱发大鼠出现明显的时间依赖的癫痫行为。给予海人酸后30 min内动物出现凝视和湿狗样抖动。给予后0.5~2h内，出现Ⅰ~Ⅴ级癫痫发作行为。2 h后则反复癫痫发作，进入癫痫持续状态。至8 h癫痫行为完全缓解。 (二)脑内注射海人酸诱发大鼠慢性癫痫模型 [造模原理] 向大鼠杏仁核内注海人酸引起海马损害，诱发癫痫。 [实验动物] 体重250~300 g雄性大鼠。 [试剂与器材] 海人酸，注射时用PBS稀释成0.05μg/μl；脑立体定位仪，脑电图仪。 [操作步骤] 1.大鼠苯巴比妥钠ip麻醉, 剪去颅顶毛, 头部固定于脑立体定位仪。常规消毒皮肤, 在中线纵向切开头皮, 暴露颅骨。 2.参照大鼠脑立体定位图谱，选右侧杏仁核(坐标：前囟后0.2mm，中线右旁开4.5mm，深8mm)注射海人酸，选左侧海马(坐标：前囟后3.0mm，中线左旁开2.0mm，硬膜下2.9mm)插入双极电极描记脑电图。 按定位坐标在此两部位用牙科钻钻开颅骨。先向左侧海马垂直插入电极，并用口腔科粘固粉固定在颅骨上。将电极与脑电图仪连接。 3. 麻醉后3 h待大鼠完全清醒后,用微量注射器向右侧杏仁核注入用PBS稀释的海人酸0.025μg或0.1μg。 4.缝合皮肤。将大鼠放在敞口有机玻璃罩内，使其能自由活动。随后进行脑电图检查及行为观察。 5. 脑电和行为观察结束后，可在深度麻醉下用4%多聚甲醛灌注固定，取脑进行组织学检查。 1982年美国某地区一些吸毒者服用了一种新型的由芬太尼衍生物合成的成瘾性毒物，由于在加工时被副产品MPTP污染，发展为不可逆性亚急性帕金森综合症。患者在生化、病理和临床表现等方面与帕金森病非常相似，尸检证实黑质损伤。此后MPTP成为复制帕金森病动物模型的有用药物。 MPTP的毒性存在种属差异，人和灵长类动物最敏感，小鼠次之，大鼠和豚鼠不敏感，一般认为用MPTP不能复制出大鼠帕金森病模型。但近年发现增大MPTP的用量(约300 mg/kg)也可以在大鼠复制出帕金森病模型。 MPTP造模动物症状的严重程度与所用剂量及动物年龄成正比，老龄动物较幼年动物对MPTP更敏感。MPTP在灵长类动物诱发帕金森病模型最常用。 [操作方法与结果] 成年健康雄性恒河猴。 1.单侧损毁模型 将MPTP 0.5~0.7mg/kg体重溶于生理盐水10ml中，以1ml/min的速度缓慢推入一侧颈总动脉。１周后出现损毁对侧肢体活动减少、向损毁侧转身。注射阿朴吗啡后则向损毁的对侧（健侧）快速旋转，而腹腔注射苯丙胺后可诱发向损毁侧快速旋转。提高MPTP剂量至0.8mg/kg,则可复制出以偏瘫为主的双侧帕金森病模型。 2.双侧损毁模型 有下列三种给药方法，可选其一： (1)腹腔注射MPTP 2~4mg/kg，每日1次，共4次。 (2)在清醒状态下经下肢隐静脉穿刺静脉给药，有两种给药方案：①将MPTP按0.35~0.5mg/kg体重溶于生理盐水20ml中，静脉点滴，第1天3次，第2、3天每日2次。②每天1次，连续5d，间隔3d后再重复应用3d。 用上述给药方法复制帕金森病模型，在急性期和亚急性期首先出现吞咽和活动障碍，不能进食和行走，难以饲养，故目前很少应用。 (3)MPTP 0.05mg/kg体重，每周2~3次，约8~18周可复制慢性帕金森病模型。此模型在行为、生化及病理改变方面与人类帕金森病极为相似，