地塞米松的结构改造及对K562细胞增殖抑制的初步研究论文.docVIP

　　地塞米松的结构改造及对K562细胞增殖抑制的初步研究论文 【摘要】 目的： 通过对地塞米松进行结构改造，探寻具有更高生物活性的新化合物. 方法： 以地塞米松为原料，通过氧化反应对其侧链进行结构改造，并采用1H NMR，13C NMR及ESIMS对其进行结构表征. 通过MTT比色法检测新化合物对K562细胞增殖的影响. 结果： 地塞米松经氧化反应后，改构为预期的新化合物. 新化合物具有抑制K562细胞增殖的生物活性. 在5及10 mg/L时，抑制率分别为9.64%±0.27%和22.75%±0.35%，高于地塞米松（P 0.01）. 结论： 地塞米松经结构改造为新化合物. 新化合物在低浓度时对K562细胞具有较好的抑制活性. 【关键词】 地塞米松 结构改造 细胞增殖 0引言 地塞米松为肾上腺皮质激素类药物.freela公司，无水乙醇、乙酸乙酯等均为国产分析纯试剂. K562细胞由本实验室保存. RPMI 1640培养液，小牛血清购于美国Gibco公司. 1.2方法 1.2.1新化合物的合成路线如图1所示. 图1合成路线（略） 1.2.2新化合物9氟16α甲基11β,17二羟基3氧1,4雄二烯17β羧酸的合成0.500 g地塞米松置于250 mL锥形瓶中，用100 mL无水乙醇溶解. 将60 mL 0.025 mol/L高碘酸溶液，1.9 mL 2.5 mol/L H2SO4溶液、37.5 mL双蒸水混合后，加入地塞米松溶液中. 室温搅拌24 h，减压除去溶剂，得白色固体初产物，置于干燥器中用P2O5干燥. 将初产品溶于500 mL乙酸乙酯中，用0.01 mol/L NaOH萃取有机相（150 mL×4），合并水相，用1 mol/L HCl调节pH至2.0. 室温放置2 h后，4℃过夜. 减压抽滤，甲醇重结晶，得白色针状晶体0.463 g. 产率92.6%，MP 260℃. 1.2.3MTT比色法测定新化合物对K562细胞的增殖抑制率采用人类髓系白血病K562细胞株，在RPMI 1640培养液中，50 mL/L CO2,饱和湿度、37℃条件下常规传代培养. 取对数生长期的K562细胞1×105/mL，100 μL加入96孔细胞培养板中. 实验分为只加RPMI 1640细胞液的阴性对照组，5,10,20,40 mg/L地塞米松溶液与5,10,20,40 mg/L新化合物溶液的试验组，每个浓度设3个平行孔. 常规培养44 h后，离心弃上清，各孔均加入5 g/L的MTT溶液10 μL，继续培养4 h，离心弃上清，加入DMSO 100 μL，振荡器上振荡5 min溶解蓝色结晶，混匀后以酶标仪于570 nm处读取各孔吸光度值(A570 nm) ，计算肿瘤细胞的生长抑制率. 抑制率=［(阴性A570 nm－给药A570 nm)／阴性A570 nm］×100%. 统计学处理： 抑制率数据以x±s表示，统计学处理用SPSS11.0统计软件进行两组间比较的t检验. 2结果 2.1新化合物的结构表征新化合物经过1H NMR，13C NMR及ESIMS对其进行了结构表征，具体数据如下： 1H NMR（400 MHz，CD3OD）δppm： 0.935(d，J=6.8 Hz，3H，21CH3)，1.130(s，3H，18CH3)，1.195和1.736(m，2H，12CH2)，1.510和1.880(m，2H，15CH2)，1.586(s，3H，19CH3)，1.588和2.152(m，2H，6CH2)，2.121(m，1H，8H)，2.397和2.706(m，2H，7CH2)，2.476(m，1H，14H)，2.990(m，1H，16H)，4.236(m，1H，11H)，6.070(t，J=2.4 Hz，1H，4H)，6.262和6.288(dd，J=1.6 Hz和J=2.0，1H，2H)，7.408(d，J=10.4 Hz，1H，1H). 表明氢原子数量与空间位置与预期相符. 13C NMR (CD3OD,400 MHZ）δppm： 15.364, 17.757,.freel/z： 377.0［M+H］+，分子量378，与预期值相符. 2.2目标化合物对K562细胞增殖抑制的影响目标化合物具有抑制K562细胞增殖的作用，且随着化合物浓度的增加其抑制活性增强（图2）. 在5，10 mg/L时对K562细胞抑制率分别为9.64%±0.27%和22.75%±0.35%，抑制活性分别高于地塞米松在5，10 mg/L时的抑制率［（5.91%±0.30%），（18.62%±0.35%），P 0.01］，差异具有显著性. 在20，40 mg/L时，目标化合物