大孔树脂对水芹菜总黄酮的分离纯化研究论文.docVIP

　　大孔树脂对水芹菜总黄酮的分离纯化研究论文 唐巧玉，周毅峰，任甜甜，江曼 【摘要】 目的研究大孔树脂分离水芹菜总黄酮的条件。方法利用静态吸附方法筛选分离水芹菜总黄酮的最适大孔树脂，利用动态吸附方法研究最适大孔树脂分离水芹菜总黄酮的条件。结果大孔树脂AB-8是吸附水芹菜总黄酮的效果最好，最佳分离条件是：上样速率是1.5 ml·min-1，5 BV80%的乙醇以1.0 ml·min-1的速率洗脱。结论利用大孔吸附树脂AB-8在以上最佳条件下，可使9.98%水芹菜总黄酮纯度提高到25.8%。 【关键词】 水芹菜； 黄酮； 大孔树脂 Abstract：ObjectiveTo study the condition of separating total flavonoids in bengal acroporous resin.MethodsUsing static absorption, optimum macroporous resin ic absorption, the condition of separating total flavonoids in bengal um macroporous resin um macroporous resin um codition ple floacroporous resin l·min-1, and the total flavonoids absorbed on macroporous resin can eluted by 80% ethanol of 5 BV, the elution speed l·min-1.ConclusionUsing up 9.98%. Key in，用蒸馏水洗至中性。再用2 BV的5%HCl冲洗 ，并关闭30 min，最后用蒸馏水洗至中性，处理完毕后用蒸馏水浸泡保存。 2.2 水芹菜黄酮粗提液的制备称取一定量的样品，料液比1∶35，乙醇浓度80%，在90℃的水浴锅中回流提取2.5h，5 000 r/min离心15 min，取其上清液。将上清液在旋转蒸发仪中浓缩，浓缩液5 000 r/min离心15 min，取其上清液，即得到黄酮粗提液。 2.3 水芹菜黄酮测定方法［10］水芹菜黄酮含量测定采用以芦丁为对照品的NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色比色法。 2.4 大孔树脂静态吸附称取各种滤干湿大孔树脂1 g，放入相同型号的烧杯中,加入黄酮粗提液20 ml，放入电动振荡器上,振荡吸附24 h，过滤，吸取吸附后的溶液0.4 ml测其吸光度，计算出树脂在室温下的吸附量和吸附率。取吸附饱和的树脂，加入80%的乙醇20 ml，浸泡振摇4 h，过滤，取解吸后的溶液0.3 ml，测定滤液中黄酮的浓度，根据黄酮解吸量计算解吸率。 2.5 AB-8大孔树脂动态吸附上柱速率测定：取处理好的AB-8大孔吸附树脂8g，装柱约10 cm高。将6份50 ml 0.3mg·ml-1的黄酮粗提液分别以0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml·min-1的速率进行上柱，再用5 BV的水洗柱，80%乙醇5 BV洗脱，然后测定其吸附率。 乙醇解吸浓度确定：将5份50 ml 0.3 mg ·ml-1的黄酮粗提液分别以1.5ml·min-1的速率进行上柱，再用5 BV的水洗柱，分别用5 BV20%，40%，60%，80%，95%的乙醇进行洗脱，然后测其解吸率。 乙醇洗脱体积确定：将6份50 ml 0.3 mg·ml-1的黄酮粗提液分别以1.5 ml·min-1的速率进行上柱，再用5 BV的水洗柱，分别用80%的乙醇2，4，5，6，7，8 BV进行洗脱，然后测其解吸率。 乙醇洗脱速率测定：将5份50 ml 0.3mg·ml-1的黄酮粗提液分别以1.5 ml·min-1的速率进行上柱，再用5 BV的水洗柱，分别以0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml·min-1的速率进行洗脱，洗脱剂为80%的乙醇5 BV，然后测其解吸率。 3 结果 3.1 吸附量的确定大孔吸附树脂的性能对黄酮的纯化效果有一定的影响，是由其物理和化学结构所决定,树脂的孔径、比表面积及极性等是影响吸附性能的重要因素，树脂吸附的本质是吸附剂和吸附质之间的范德华力，几种树脂的型号和物理结构参数见表1。表1 4种大孔树脂的物理性质 以“2.4”项的方法对X-5，AB-8，NKA-9，NKA 4种大孔吸附树脂对水芹菜黄酮水溶液的吸附量做测定。从表2可看出，AB-8大孔吸附树脂对水芹菜黄酮水溶液的吸附量最大，X-5次之。说明对水芹菜总黄酮的树脂柱的吸附应优先选用弱极性的树脂。从表3可看出，AB-8大孔吸附树脂对水芹菜黄酮水溶液的解吸率最大，NKA次之。综合考虑各树脂的