导向性人干扰素α2a工程菌的高密度发酵论文.docVIP

　　导向性人干扰素α2a工程菌的高密度发酵论文 孟洁如，颜真，赵宁，张英起 【关键词】 大肠杆菌 【Abstract】 AIM: To optimize the pilotscale fermentation procedure of E.coli producing tumor targeted human IFNα2a and to obtain high cell density and high level expression of the aim protein. METHODS: The effects of the rang of pH, dissolved oxygen, culture time, induction time and the manner of feeding entation tank. RESULTS: Under the established conditions, ed a threetime repeated fermentation. The final cell density 25-30 and more than 50 g of entation procedure is stable, of short cycle and entation; IFN; Escherichia.coli 【摘要】 目的：优化大肠杆菌表达导向性人干扰素α2a的中试发酵工艺，以获得工程菌的高密度发酵和目的蛋白的高表达. 方法：采用发酵罐发酵，对影响工程菌生长和目的蛋白表达的条件，如pH值、活化时间、诱导时间、溶氧范围及补料流加方式等进行优化. 结果：根据优化条件，连续三批重复发酵10 L工程菌.freel 25~30，菌体获得量均可达湿重50 g/L以上，目的蛋白表达量均为3.2×109 U/L以上. 结论：此发酵工艺具有周期短、产量高以及重复性稳定性好的特点，为下游纯化和进一步大规模生产奠定基础. 【关键词】 发酵；干扰素；大肠杆菌 干扰素α(IFNα)是一种生物学活性相当复杂的细胞因子,具有抗病毒活性、免疫调节、抑制细胞增殖、抗肿瘤血管生成以及与多种淋巴因子协同作用等多种生物功能［1-3］. NGR是通过噬菌体展示技术筛选出的, 可以特异性地与肿瘤新生血管内皮细胞上的CD13分子结合的多肽［4］. 为了进一步提高IFNα2a的抗肿瘤活性，同时降低毒副作用，减少用药量，我中心研制和开发了一种新型导向性人IFNα2a,即将IFNα2a与NGR基因重组，并表达IFNα2aNGR融合蛋白，通过NGR与CD13的结合作用，使IFNα2a在肿瘤组织的新生血管处富集，针对性地发挥抗肿瘤和抑制肿瘤血管形成的作用. 动物实验表明, 它比天然基因工程人IFNα2a的抗肿瘤作用增强,毒副反应下降［5］,并具有更广泛的适应证.具有广阔的应用前景.为保证进一步大规模生产,.freelol/L NaOH溶液，将溶液的pH值全部调为7.0. 培养基和补料在121℃高压灭菌20 min，各种培养基中都加入氨苄青霉素溶液至100 mg/L. 1．1．3仪器NBSML8000发酵罐，美国NBS公司；JL21型冷冻高速离心机为美国Beckman公司产品. 1．2方法 1．2．1发酵用菌种的筛选取一管冷冻保存的甘油菌，用接种环接种于LB平板上，37℃培养过夜，挑单克隆菌种于含有5 mL LB培养液的试管中，30℃培养至A600 nm为0.4~0.6时，升温至42℃再培养4 h，离心收集菌体，采用eng JR, Yan Z, Zhao N, et al. Stability of biological characteristics of rebinant bacterial strain expressing tumor targeted IFNα2a［J］. Chin J Biol, 2003; 16(4): 222-224. ［6］ Makides SC. Strategies for the achieving highlevel expression of genes in Escherichia coli［J］. Microbiol Rev, 1996; 60(3): 512-538. ［7］ Khalilzadeh R, Shojaosadati SA, Bahrami A, et al. Overexpression of rebinant human interferongamma in high cell density fermentation of Escherichia coli［J］. Biotechnol Lett, 2003;25(23):1989-19