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葡聚糖凝胶过滤分离蛋白质 实验原理 实验材料与器材 实验步骤 实验原理 凝胶过滤层析利用有一定孔径的多孔的亲水性凝胶作为载体，当分子大小不同的混合物通过这种凝胶柱时，各物质在柱中存在两种运动，一是随洗脱液垂直向下移动，二是无定向的扩散运动。直径大于凝胶孔径的大分子，不能进人胶粒内部，便直接沿着胶粒间隙溶剂先流出，称为全排出)；小分子物质，直径小于凝胶孔径，能自由进出能容纳下它们的孔穴，绕道而行，结果在柱中的保留时间增长而最后流出;中等大小的分子，能进人部分胶粒内部，从而在柱中的保留时间较大分子长，但较小分子短，中间流出。于是，流过凝胶柱的混合物按其分子大小W被分离。 混合物中某一被分离成分在一定的凝胶层析柱内的洗脱，通常用分配系数(Kd)来表示。其定义为： Kd=（Ve一V0）/ Vi Ve，某一被分离物成分被洗脱时所用洗脱液的体积 Vo，凝胶颗粒间自由空间的总体积 Vi，胶颗粒内部孔穴的总容积 大分子物质，其Kd=0，小分子能全部进人胶粒内的Kd=1，中等大小分子，Kd在O～1之间。 凝胶过滤法的分辨率（ρ）是凝胶层析中的另一个主要特征常数。从数学角度上可以表示为：