第十章 复制总结.docVIP

复制的基本规律 ⑴半保留复制 子代双链DNA中一条链为母体链，另一条链为新合成的，通过氯化铯（CsCl）密度梯度离心实验得到验证。 ⑵有特定的复制起始点 原核生物：1个复制起始点 单复制子 真核生物：多个复制起始点 多复制子 ⑶方向性 新链的合成都是5’ 3’ ⑷双向复制 从复制起始点向两个方向解链，形成两个复制叉，复制向两个方向同时进行 ⑸半不连续复制 沿一个复制叉方向看，以3’ 5’方向的母链为模板时，其互补链的合成顺解链方向连续合成，先复制，故称为领头链或前导链；以5’ 3’方向的母链为模板时，其互补链的合成与解链方向相反，后复制，故称为随从链或滞后链。 复制所需要的物质 一、底物（原料） dNTP：dATP、 dGTP、 dCTP、 dTTP 基本化学反应：（dNMP）n+dNTP （dNMP）n+1+ppi 二、解旋酶 原核生物：DnaB（解旋酶）DnaA蛋白识别复制起始点，DnaB蛋白在DnaC协助下结合解旋 真核生物：DNA-polδ 三、SSB 结合在解开的单链上，其结合具有协同效应，结合-脱离-结合-脱离…………… 作用：①维持模板处于单链状态 ②保护单链完整 四、引物酶 催化引物生成，引物末端留有3’-OH 原核生物：DnaG蛋白 催化生成RNA引物 真核生物：DNA-polα 催化生成RNA引物，引物中还包括一小段DNA 五、DNA 聚合酶（DNA-pol） 原核生物 DNA-polⅠ ①5’-3’聚合活性，主要用于充填短片段间间隙的作用。 ②3’-5’核酸外切酶活性，切掉错误配对碱基，置换一正确碱基，称为校读作用（高保真复制机制） ③5’-3’ 核酸外切酶活性，切除引物或突变片段 用特异的酶如木瓜蛋白酶可将其水解为两部分，小片段（323aa）保留有5’-3’ 核酸外切酶活性，Klenow大片段，保留有5’-3’聚合活性和3’-5’核酸外切酶活性。 DNA-polⅡ 主要用于应急修复 ①5’-3’聚合活性 ②3’-5’核酸外切酶活性 DNA-polⅢ是复制中主要起聚合作用的酶，α、ε、θ共同构成核心酶 ①α亚基具有5’-3’聚合活性 ②ε亚基具有3’-5’核酸外切酶活性 ③ε亚基具有碱基选择功能（高保真复制机制） 真核生物 DNA-polα、β、γ、δ、ε DNA-polδ复制中主要起聚合作用的酶 附：高保真性复制还依赖碱基配对原则 六、拓扑异构酶 理顺DNA链，使正超螺旋变为负超螺旋，易于解旋酶解链 作用过程：①切断磷酸二酯键 ②松解超螺旋 ③连接 七、连接酶 连接碱基互补基础上的双链中的单链缺口，形成磷酸二酯键。 复制过程 原核生物 一、起始 起始点保守序列：3组串联重复序列，两对反向重复序列，均富含A、T。 DnaA蛋白识别并结合在富含A、T的两对反向重复序列上，DnaB蛋白在DnaC蛋白协助下结合在DNA链上并促使其解链，并不断置换掉DnaA蛋白，然后SSB结合在解开的单链上使其保持单链状态，为下一步复制提供模板，引物酶DnaG蛋白进入，在适当的位置以解开的DNA链为模板合成一小段RNA引物，引物合成完成后，留有游离的3’-OH末端，为DNA复制进入延长阶段做好准备。 二、延长 顺复制叉方向看，当模板为3’-5’时，其新链可在引物基础上由聚合酶连续地沿复制叉方向合成，而另一条模板链的新链则等链解开一段后，沿与解链方向相反的方向分段合成。解螺旋酶向两个方向继续解链，不断解开双链，随着解链的进行，复制叉前方变为正超螺旋，使解螺旋酶难以继续解链，因此拓扑异构酶松解超螺旋，正超螺旋变为负超螺旋，使解链可以继续进行。 三、终止 包括切除引物（RNA酶或DNA-polⅠ）、充填引物切除后所形成的空隙(DNA-polⅠ)、DNA连接酶最后连接成完整的链。 真核生物最后还要在两端合成称为端粒的结构。 第四节、逆转录 RNA逆转录酶 RNA-DNA 逆转录酶 DNA 逆转录酶 DNA-DNA 第五节、DNA损伤与修复 突变类型：错配、缺失、插入、重排 缺失、插入可导致框移突变。 修复机制：直接修复、切除修复（最重要的修复机制）、重组修复、SOS修复 切除修复过程：识别损伤部位-切除损伤部位-填补空隙-连接