大麦黄矮病毒PAV株系的CP与GFP融合基因的构建和表达.pdfVIP

植物病理学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 40(5)：,548—551(2010) e ∈ ∈ e —∈ ∈— 、 8研究简报 8 } 暑号 _三 ； ．：}≥” 大麦黄矮病毒 PAV株系的 CP与 GFP 融合基 因的构建和表达 孙 润 红 。 吴云锋 ，张银武。，魏 婷 ，武科科。，赵 震 ，杨 洋 ， (西北农林科技犬学，|l二命科学学院，杨凌 712100；。西北农林科技大学植物保护学院，陕酉省农、l分子生物学 重点 验室，杨凌 712t00；河南驻马J占L蔡县农技站，上蔡 463800) ConstructingandexpressingoftheCPofBYDV--PAV andGFPfusiongeneinEsche-‘ richiacoli SUN Runhong ，WUYun．feng ，ZHANG Yin—WH ，WEITing，WU Ke—ke，ZHAO Zhen ，YANG Yang。 (C‘ollegesofLifeSciences，NorthwestAFUniversity，Yangling7121O0，China； Collegeof PlantProtection，NorthwestAFUniversity，ShaanxiKeyLaboratory ofM olecularBiology forAgriculture，Yangling712100， China：HenanShangcaiAgriculturalTechnologyServiceCenter，Shangcai463800，China) Abstract：Accordingtothepublishednucleotidesequences，CPgeneofbarleyyellow dwa矿 virusPAV (BYDV—PAV)wassynthesizedbyreversetranscriptionpolymerasechainreaction (RT—PCR)．Thereporter geneGFPwasputtothedownstream ofwholeCPgenesequenceofBYDV—PAV afterdoubleenzymediges— tion，PCR identificationandsequencing．Thegreenfluorescenceprotein expression system ofcoatproteinof BYDV—PAVwassuccessfullyconstructedandexpressedinEscherichiacoilBL21(DE3)plysS．Theexpression productwasconfirmed by SDS—PAGE，W estern blotanalysisand fluorescencemicroscope．The fusion gene CP—GFPwasexpressedintherangeof15—22oC． butcouldnotbeexpressedat23—37oC． Theresultsprovided abaseforstudyingonBYDV—PAV movementinaphidfurther． Keywords：BYDV—PAV；CP；GFP；fusionPCR 文章编号 ：0412—0914(2010)05—0548—04 大麦黄矮病 毒 (Barleyyellow dwa矿virus， (coatprotein，cP)，在 国内仅有 Chang等¨将 BYDVs)所引起的黄矮病是危害小麦生产 的重要 BYDV—GAV株系该蛋自在大肠杆菌中做了高效表 病毒性病害之一，是一种世界性病害。BYDVs属 达 。在 国外 ，Masoud等 只将 BYDV—PAV 的CP 于黄症病毒科 (Luteovirdae)的黄症病毒属 (Luteo— 蛋 白中间的一段 (22kDa中的 14kDa)进行 了表 virus)。此病毒粒子 由一条正义单链 RNA组成， 达。本研究将大麦黄矮病 PAV株系的CP基因与 呈正20面体对称球形，直径24～30nm，通过以蚜