基因枪法导入GUS基因获得小麦条锈菌突变体.pdfVIP

植物病理学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 39(5)：466-475(2009) 基因枪法导入 GUS基因获得小麦条锈菌突变体 卢丽丽，张如佳 ，王美南，王 阳 ，井金学 ，匾 (两』七 科技 久学植物保护学院，杨凌 712100) 摘要：采用基因枪转化法用带有 口一彻惦醛酸 (GUS)报告基因的质粒pGUS6L20转化小麦条锈菌，建立了优化的转化体 系；在转化当代的条锈阳rf1 刊rGUS， 瞬时表达的菌株 ；连续继代转接培养后，在转化后第 1代 (T1)和第2代 ( ) 条锈菌中检测到了GUS 因稳定 的菌株；利用GUS报告基因和毒性标记相结合的方法 ，经过3代筛选鉴定，在小麦条 锈菌中国鉴别寄主尤腹 Ⅱ fll仉rjI655 ，各获得 1个稳定的毒性突变体，经PCR及PCR—sou~emblot证实外源片段已整 合到毒性突变菌株的基 组中。该研究表明基因枪转化法是获得条锈菌毒性突变体的有效方法。 关键词：小麦条锈菌；基因枪；毒性变异；GUS Virulenttransgenic mutantsobtained by particle bombardmenttransformation of Puccinia striiformisf．sp．triticiwith the GUS gene LU Li—li，ZHANG Ru-jia，WANG Mei—nan，WANGYang，JINGJin—xue，ILlZhen-qiI (CollegeofPlantProtection，NorthwestAFUniversity， Yangling712100 ，China) Abstract：Toobtainvirulentmutantstains，theoptimizedtransformationsystem wasestablishedandplasmid pGUS6L20containingtheGUSgenewastransfomredintourediniosporesofPucciniastriiformisf．sp．tritici viaparticlebombardment．Thetrna sientexpressionofGUSgenewasidentifiedinthertansformeduredinios— pores．TheGUS—carryingsporeswerecultured and increasedconsecutively．GUS genewasexpressed inthe urediaandurediniosporesofT1andT2generationofthestriperustfungus．Twoinsertionmutantsofincreased viurlencewereidentifiedonwheatcultivrasJubilejinaⅡandKangyin655．respectively．ThepresenceofGUS genewasdetectedbypolymerasechainreaction(PCR)andSouthernblotinhtesetwovirulentmutants．The resultsshowedthattheparticlebombardmentwasaneffectivewaytoobtainhtevirulentstrainsofP．strifior． mis． Keywords：Pucciniastriiformisf．sp．tritici；particlebombradment；pathogenicityvariation；GUS 中图分类号：$435．121．42 文献标识码：A 文章编号：0412-0914(2009)05-0466—10 小麦条锈病是世界各小麦产区最为重要的病 究，对解决小麦品种抗病性丧失问题有着十分重要 害之一，其病原小麦条锈菌(Pucciniastriiformisf． 的理论和实践意义…。 sp．tritici)通过毒性变异产生新小种，导致小麦品 小麦条锈菌突变现象是Gassner和 Straib于 种抗病基因失效，引起小麦条锈病周期性流行。因 1932年首次发现的 ，但 由于小麦条锈菌的寄生 此，开展小麦条锈菌的毒性基因及