安徽野生香菇遗传多样性及杂种优势的RAPD分析.pdfVIP

维普资讯 技 术 与 方 法 因则无甲基化现象。当在hpt基因的载体上 后，转基因稳定性大大提高，可明显降低因 连接一段同源基因片段时，整合后 hpt基因 插入位点而造成的位置效应。 产生轻微的甲基化或不甲基化。此实验还证 2．增强子的正确利用 增强子在转化外 明同源基因的转化易产生同源整合，异源基 源基因表达中具有重要作用，合理使用增强 因的转化易产生非同源整合。当转化载体完 子可以提高外源基因的表达水平。 全是外源DNA时，整合后甲基化严重，当带 3．优化先导序列、提高翻译效率 翻译 上一段同源基因时可以降低外源基因甲基化 同样是调控外源基因表达的重要环节，3端 程度。推测其原因是同源基因整合容易发生 的翻译先导序列对翻译效率起着重要作用。 在编码区，异源基因容易整合到染色体的甲 先导序列的长度和二级结构被认为是重要的 基化区域，同源基因与异源基因的融合，有 决定因素。此外，筛选合适的同源启动子、选 利于弓I导异源基因在编码区整合。 用同源标记基因、采用农杆菌转化方法等方 虽然许多真菌的转化因同源片段而提 面也是将来研究的重点。通过各方面条件的 高，但在灰盖鬼伞中，即使是同源基因的转 优化，方能建立起一个高效、简便易行的食用 化，也以非同源整合为主，且同源整合率不 菌转化系统。 因同源片段的加长而有所提高。在双孢蘑菇 (胡乐琴 上海水产大学生命与技术学院) 的研究中，证明同源整合率为6o％，但转化 率却未因此而提高。这表明了影响转化的因 出 坐 凿 素很复杂。 ；技术与方法l 五、提高食用菌转化效率的可能措施 带 带 { 带 带 蒂 带 带 带 币 1．引入特殊序列，构建高效表达栽体 外源基因表达与整合位点有关，可以在载体 安徽野生香菇遗传多样性 上引入整合介导区，整合介导区是与受体基 及杂种优势的RAPD分析 因DNA有某种同源性的DNA序列，能有效 地引导载体发生同源整合。 王子迎等采用随机扩增多态性DNA 基因转录与染色质的高级结构有关，只 (RAPD)技术，利用 l7个引物对26个安徽野 有处于活性染色质部位的基因才能转录表 生香菇菌株和6个香菇栽培品种进行了遗传 达。基因座位控制区(LCR)是一种顺式调控 多样性分析，并构建了遗传相关聚类图。在 元件，具有稳定染色质疏松结构的功能，使 128个 RAPD标记中，多态性标记为 104个， 相关基因在基因组任何位置都能得到表达。 占81．3％。聚类分析显示，当以相异距离0．25 在LCR结构域中含多种反式因子的结合位 为阈值时，32个菌株被划为5个RAPD遗传 点，具有增强子样功能。带有LCR结构域的 组，多数菌株之间遗传相似性较低。表明供 基因都能高效表达。细胞核基质支架附着区 试菌株在DNA水平上存在比较显著的遗传 (MAR)构建策略是利用染色质高级结构的 变异，具有较丰富的遗传多样性。杂种优势 特点，以改进转基因稳定性和提高表达率的 的检测表明亲本间遗传距离较大的组合其杂 一 种方法。将MAR连接到外源基因两侧， 种优势也较强。 可使外源基因成为一个独立的转录单元，减 (中国农学通报) 少周边序列的影响。有研究表明，引入MAR 4