CSFV和PRRSV双重RT-PCR检测方法的建立及其应用.pdfVIP

安徽农业大学学报，2009，36(2)：252-256 JournalofAnhuiAgriculturalUniversity CSFV和 PRRSV双重RT-PCR检测方法的建立及其应用 谢金文 ，沈志强 ，管 宇 ，韩 玲 ，任艳玲 ，曲光刚 (1．山东省滨州畜牧兽医研究院，滨州256600；2．山东绿都生物科技有限公司，滨州256600) 摘 要：为建立一种能够同时快速诊断猪瘟 (CSF)和猪繁殖与呼吸综合征 (PRRS)2种传染病的方法，根据 GenBank上已发表的猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核苷酸序列，分别设计并合成2对能特 异性扩增CSFV、PRRSV的引物，经过条件优化后，建立了检测CSFV、PRRSV的双重RT—PCR方法，扩增2种病毒的 片段 ，大小分别为508bp和432bp。试验证明，该方法具有 良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性，简便、快速、高 效，为CSFV与PRRSV的快速诊断及进一步的CSFV与PRRSV的流行病学研究提供了重要的技术支持。 关键词：猪瘟病毒；猪繁殖与呼吸综合征病毒；双重RT—PCR 中图分类号：$854．43 文献标识码：A 文章编号：1672—352X(2009)02-0252-05 EstablishmentandapplicationofadoubleRT—PCR forclassicalswinefever virusandporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus XIEJin．wen，SHENZhi．qiang’，GUANYu’，HANLing，RENYan—ling，QUGuang．gang (1．ShandongBinzhouAnimalScienceVeterinaryMedicineAcademy，Binzhou256600； 2．ShandongLvduBio—Science＆TechnologyCo．Ltd，Binzhou256600) Abstract：Accordingtothenucleotidesequencesofclassicalswinefevervirus(CSFV)andporcinereproduc— tiveandrespiratorysyndromevirus(PRRSV)inGenBank，twopairsofprimersweredesignedandsynthesized．A doubleRT-·PCRwasdevelopedbasedonthesetwopairsofprimerswhichamplifiedtheCSFV virus--specificsegment with508bpandthePRRSVviurs-specificsegmentwith432bpinsizesaftertheconditionsofPCRwereoptimized． TheresultsindicatethatthedoubleRT—PCRreactionafteroptimizationshow agoodsensitiveandspecific，repeat- able，stability，simple，rapidandhighlyeffectfordiagnosisCSFVandPRRSV．Itcanbeusedinrapiddiagnosisof CSFV andPRRSV infurtherepidemiologicalinvestigation． Keywords：classicalswinefeverviurs；porcinereproductiveandrespiratorysyndromeviurs；doubleRT—PCR 猪瘟 (classicalswinefever，CSF)是由猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征(porcinereproductiveand (classicalswinefevervirus，CSFV)引起的一种流行 respiratorysyndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合 广、高度接触性的烈性传染病，国际兽疫局将其列为 征病毒(