家蚕丝素蛋白轻链基因（Fib-L）cDNA及启动子的克隆与分析.pdfVIP

第4l卷第 l0期 东 北 农 业 大 学 学 报 41f101：68~72 2010年 lO月 JournalofNortheastAgriculturalUniversity 0ct．20l0 家蚕丝素蛋白轻链基因(Fib—L)cDNA及启动子的克隆与分析 郝碧芳L，徐 日方，周 钰 ，朱嘉楠 ，张国政L (1．江苏科技大学蚕业研究所，江苏 镇江 212018；2．中国农业科学院蚕业研究所，江苏 镇江 212018) 摘 要：为了利用家蚕丝素蛋 白轻链基因(Fb／—L)及启动子元件开展转基 因研究，克隆了家蚕品种 797的 Fib—LcDNA及启动子，并比较了6种不同品种来源的Fb／—L基因的cDNA序列。结果表明，轻链基因cDNA长为 786nt，编码了包括由l8个氨基酸组成的信号肽在内的共262个氨基酸的蛋白质前体；启动子序列分析显示其包 括典型的TATA盒和类CAAT盒序列以及丝腺特异性结合位点等。用Fib—L启动子控制报告基因魄 ，进行家蚕 BmN细胞内的瞬时表达研究，结果表明，Fib—L启动子驱动的 报告基因可以在BmN细胞瞬时表达。 关键词：家蚕；丝素蛋 白轻链；cDNA；启动子 中图分类号：$881．24 文献标志码：A 文章编号：1005—9369(2010)10—0068—05 Cloning andanalysisofcDNA and promoterofBombyx morifibroin lightchain／HAO Bifang’一，XUFang’，ZHOUYu’，ZHUJianan’，ZHANGGuozheng’，(1． SericulturalResearchInstitute，JiangsuUniversityofScienceandTechnology，ZhenjiangJiangsu 212018，China；2．SericulturalResearch Institute，Chinese Academy ofAgriculturalSciences， ZhenjiangJiangsu212018，China) Abstract：Toconductthetransgenicresearchonthebasisoffibroinlightchain (Fib—L)andits promoter，Fib-LcDNA and itspromoterofsilkworm 797wereclonedandanalyzedwiththatofotherfive silkworm strains．TheresultsshowedthatthelengthofcDNAwas786nt，whichencoded262aminoacids precursorprotein including 18aminoacidsignalpeptides，meanwhile，thepromotercontainedthetypical TATA box．C,aJ~T likeboxandsilkglandspecialbindingsite，andEgfpdrivenbyFib—Lpromotercanbe transientexpressioninBmN cellthroughtransfection． Keywords：silkworm；fibroinlightchain；cDNA；promoter 家蚕(Bombyxmori)作为一种独特经济昆虫和 基因的启动子是一种超强启动子，而且其丝素蛋 白 遗传学研究的模式昆虫，其 5龄家蚕后部丝腺强大 形成、分泌也已高度特异性，因此，许多学者广泛 的合成和分泌丝素蛋白的能力是国内外许多学者研 利用丝素基因启动子强大的启动能力及其时空特异 究的热点。丝素蛋白是由350ku的重链(Fib—H)和 性，致力于外源 目的基因在家蚕丝腺组织中的定点 25．8ku的轻链(Fib—L)通过二硫键结合而成，另外