鸭梨多酚氧化酶基因CDS区的克隆及表达.pdfVIP

维普资讯 果 树 学 报 2008，25(4)：577-580 JournaJlofFruitScience 鸭梨多酚氧化酶基因CDS区的克隆及表达 李桂琴 ，李会宣 ，许冬倩 ，刘 坤 17张玉星 (河北经贸大学生物科学与工程学院，石家庄 050061；。河北农业大学园艺学院，河北保定 071001) 摘 要：以鸭梨 (所 Msbretschn,ideriRehd．)果皮基 因组 DNA为模板 ，根据 已经发表 的多酚氧化酶 (polyphenoloxi-_ dase．PPO)基因保守序列设计引物 ，利用PCR技术 ，克隆得到鸭梨多酚氧化酶编码区序列，将此核酸序列克隆到载体 DGEM一-T，酶切鉴定后测序 ，结果表 明该段序列含有 1782个核苷酸 ，编码 593个氨基酸。对鸭梨多酚氧化酶基因片段 的一致性分析和进化树分析表 明，该片段与沙梨 ( r pyrfiolia，AB056680)、苹果 (Malusdomestica，L29450)、李 (／5-Mn 5a／／cin。．AY866432)以及杏 (Prunusarmeniaca，AF020786)的一致性分别为 99％、96_3％、82％和 51．4％，绘制 的进化树和形态学分类地位相一致。将该片段连接到表达载体 pET39b上 ，获得的重组子命名为 pEW3％一PPO，热激 法转化表达受体大肠杆菌 BL21(DE3)N~ ，用IPTG进行诱导 。SDS—PAGE分析表 明，PPO基因在大肠杆菌 中被诱导 表达蛋 白质相对分子质量约 66ku，检测表明具有多酚氧化酶 的活性 。 关键词：鸭梨 ；多酚氧化酶；基 因克隆；表达 中图分类号：$661．2 文献标识码：A 文章编号：100％9980(2008)04-577—04 CloningandexpressionofpolyphenoloxidasegeneofCDSfrom Yalipear LIGui—qirf-一，LIHui一．xuan，XU Dong-一qian ，LIU Kun ，ZHANGYu—xing (CollegeQ厂BiologcdScienceandEngnieering，HebeiUniversityofEconomicsnadBusiness，Shijiazhunag，Hebei050061China；2Horti— culturalCollege，HebeiAgriculturalUniversity，Baoding，Hebei071001Chin Abstract：Thecodondomainsequenceofpolyphenoloxidase(PPO)geneofYalipear(PyrusbretschneidedRehd．)wasam— pinedbyPCRmethodaccordingtothetemplateofgenomicDNA ofYahpear，whoseprimersweredesignedbyhteCOil— serveddomainofhtepublishedPPO genesequenceinotherplants．Thefragment ofPPO genewasclonedtohtevector pGEM—T，htensequenced．SequenceanalysisshowedthathteCDSofPPO geneniYalipearconsistedof1782nucleotides， encodingapredictedpolypeptideof593aminoacids．AlignmentofnucleotidesequenceandotherPPOgenesshowedhtatthe PPOgeneofPzr~sbmtschneideriRehd．hadanidentityof99％，96_3％，82％and51．4％toPPOgenefrom r pyrfidia， Mainsdomestica。Prunussalicina，andP armeniaca，respectively．Th ephylogenetictr