芹菜非特异性脂转移蛋白基因的克隆与表达分析.pdfVIP

园 艺 学 报 2012 ，39 （7 ）：1293 –1302 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 芹菜非特异性脂转移蛋白基因的克隆与表达分析 蒋 倩，王 枫，侯喜林，王 镇，李梦瑶，马 静，刘梦叠，熊爱生* （南京农业大学园艺学院，作物遗传与种质创新国家重点实验室，农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点 实验室，南京 210095 ） 摘 要：以芹菜（Apium graveolens ）‘六合黄心芹’、‘津南实芹’和‘美国西芹’为试验材料，采用 RT-PCR 技术分别获得其 cDNA 序列。序列分析表明：来源于 3 个芹菜品种的非特异性脂转移蛋白 （Non-specific lipid transfer protein ，nsLTP ）基因核苷酸序列高度保守，全长357 bp，编码 118 个氨基酸， 起始密码子 ATG 之后含有 27 个氨基酸残基的信号肽序列，推测其成熟的蛋白含 91 个氨基酸残基，预测 其蛋白质分子量为 11.75 kD，pI 值为 9.36 。芹菜的nsLTP 蛋白主要由 α–螺旋和随机卷曲组成。空间结构 上分析显示，芹菜 nsLTP 蛋白中 H1 区域明显分为 H1a 和 H1b 两个亚区域，而模板碧桃中 H1 区域为一个 连续的螺旋结构，存在明显的差异。进化分析显示，芹菜 nsLTP 与香石竹、大洋洲滨藜等植物的 nsLTP 相似性较高，在保守位置具有 8 个半胱氨酸残基。实时定量 PCR 表达分析表明，该基因主要在芹菜的茎 以及茎尖生长活跃中心表达，具有明显的组织特异性。 关键词：芹菜；脂转移蛋白；基因克隆；实时定量 PCR ；基因表达 中图分类号：S 636.3 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2012 ）07-1293-10 Cloning and Expression Pattern Analysis of nsLTP Gene in Celery JIANG Qian ，WANG Feng ，HOU Xi-lin ，WANG Zhen ，LI Meng-yao ，MA Jing ，LIU Meng-die ，and * XIONG Ai-sheng （College of Horticulture，Nanjing Agricultural University ，State Key Laboratory of Crop Genetics and Germplasm Enhancement ，Ministry of Agriculture Key Laboratory of Biology and Germplasm Enhancement of Horticultural Crops in East China ，Nanjing 210095 ，China） Abstract ：In this study ，full-length of cDNA sequences of non-specific lipid transfer protein （nsLTP ） gene were cloned from celery （Apium graveolens ）cultivars ‘Liuhe Huangxinqin ’，‘Jinnan Shiqin ’and ‘Meiguo Xiqin ’using reverse transcript PCR （RT-PCR ）. Sequence analysis shows：The cDNA nucleotide sequences are highly conserved from the three cultivars. The length of the gene is 357 bp，containing a complete open reading frame to encode 118 amino acids