柿果实内切–1,4–β–葡聚糖酶基因克隆与定量表达分析.pdfVIP

园 艺 学 报 2011 ，38 （10）：1893 –1900 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 柿果实内切 –1,4 –β–葡聚糖酶基因克隆与定 量表达分析 * 宋康华，饶景萍 ，常晓晓，祝庆刚 （西北农林科技大学园艺学院，陕西杨凌 712100 ） 摘 要：以成熟期‘富平尖柿’（Diospyros kaki L. ‘Fuping Jianshi ’）为材料，采用RT-PCR 和 RACE 相结合的方法，克隆柿果实中内切–1,4 –β–葡聚糖酶基因（EG ）cDNA ，并在此基础上采用实时荧光 PCR 定量技术检测采后常温下柿果及 GA3 、ABA 和 1-MCP 处理柿果软化过程中该 EG 基因转录水平的表 达特点。试验结果：获得了一个内切–1,4 –β–葡聚糖酶基因cDNA，命名为DKEG1 （GenBank accession number ：HQ222561 ），长2 011 bp ，编码 545 个氨基酸，末端含有 CBD 区域。实时荧光 PCR 定量技术检 测发现常温下对照组柿果采后 3 d 时出现DKEG1 基因表达高峰，下降后又逐渐上升，并在 12 d 时出现第 2 个高峰；赤霉素明显抑制了柿果实在整个后熟过程中 DKEG1 基因的表达，尽管在 6 d 时也有升高，但 与对照相比全程表达量均极低；ABA 处理大大提高了DKEG1 基因的表达量，没有出现采后 3 d 的表达高 峰，但在 6 ~ 18 d 期间其表达量均高于对照的最高峰值，其表达高峰出现采后 9 d ；1-MCP 处理的柿果表 达高峰比对照推迟 9 d，且前期表达量显著降低，但后期又上升。据此推断柿果实DKEG1 的表达受乙烯 生成和乙烯信号转导的调控，进而参与果实的后熟软化过程。 关键词：柿；果实；软化；EG 基因；实时荧光定量 PCR 中图分类号：S 665.2 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2011 ）10-1893-08 Studies on Cloning and Real-time Expression of Endo-1,4-β-glucanase Gene in Persimmon Fruit * SONG Kang-hua，RAO Jing-ping ，CHANG Xiao-xiao，and ZHU Qing-gang （College of Horticulture，Northwest A F University ，Yangling，Shaanxi 712100，China） Abstract ：A full length of endo-1,4-β-glucanase gene was isolated from mature persimmon （Diospyros kaki L. ‘Fuping Jianshi ’）fruit by RT-PCR and RACE （rapid amplification of cDNA ends ） method ，and its mRNA expression level of different treatments （GA3 ，ABA ，1-MCP at room temperature） on persimmon fruits were further investigated by the Real-time fluorescence qPCR. The results showed that the obtained EG gene ，named DKEG1 （GenBank accession number ：HQ222561 ），was 2 011 bp in length，and encoded 545 amino acid，with CBD