发根农杆菌K599对菊花活体转化及其高效再生.pdfVIP

园 艺 学 报 2011，38（7）：1365–1370 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 发根农杆菌K599 对菊花活体转化及其高效再生 * 向太和，王 琳，蒋 欢，田璟鸾 （杭州师范大学生命与环境科学学院，杭州310036 ） 摘 要：发根农杆菌 K599 侵染菊花无菌苗刻伤的叶片形成转基因不定根，生根频率为 88.0%；不定 根经过诱导培养形成愈伤组织，并再生完整植株，愈伤组织诱导率和分化率分别为 75.0%和 63.3% 。诱导 的不定根和再生植株经过 PCR 鉴定含有 K599 Ri 质粒中的 rolC 基因，qRT-PCR 检测显示 rolC 基因在再 生转基因植株中实现了正常表达。再生植株表现出矮缩、多毛状根特征，并能正常开花。建立的利用活 体材料直接作为发根农杆菌 K599 侵染的受体诱导不定根的遗传转化体系，能克服假阳性不定根的出现； 同时，利用不定根繁殖过程中顶端生长点区域无菌的特点，通过截取不定根顶端靠近生长点区域进行继 代培养，结合使用头孢霉素杀菌，能达到有效抑制和杀灭农杆菌的目的，在随后的不定根诱导愈伤及分 化过程中无须再使用抗生素杀菌，提高了转基因再生效率，为菊花的矮化育种和目标基因的转移提供了 良好的试验体系。 关键词：菊花；发根农杆菌；不定根；诱导；再生 中图分类号：S 682.1+ 1 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2011 ）07-1365-06 Hairy Roots Induced by Agrobacterium rhizogenes K599 in Chrysanthemum in Vivo and Plant Regeneration from Hairy Roots * XIANG Tai-he ，WANG Lin ，JIANG Huan ，and TIAN Jing-luan （College of Life and Environment Sciences，Hangzhou Normal University ，Hangzhou 310036 ，China ） Abstract ：The transgenic hairy roots were formed on cut leaves of chrysanthemum plantlet by Agrobacterium rhizogenes K599 with frequencies of 88.0%. The calli were induced from hairy roots and plantlets were regenerated from calli at rates of 75.0% and 63.3% respectively. The transgenic hairy roots and plantlet were confirmed by PCR analysis with primers from K599 Ri plasmid rolC gene. Quantitative RT-PCR （qRT-PCR ）analysis showed that rolC gene was normally expressed in the regenerated transgenic plants. Regenerated plants harbored a character of dwarf ，more hairy roots and flowering normally. Organism in vivo directly as a receptor for infection by Agrobacterium rhizogenes K599 ，it overcame the emergence of false-positive