猪传染性胃肠炎病毒S基因全抗原位点片段与猪呼吸道冠状病毒缺失片段表达产物的反应原性比较.pdfVIP

第21卷 第5期 病 毒 学 报 V01．21No．5 呈Q Q三生旦旦 ￡旦!盟垦墨垦』Q堕垦盟叁生Q!y!垦Q坠Q鱼Y 墨曼P!呈里坠堕 兰坐塑三 猪传染性胃肠炎病毒S基因全抗原位点片段及猪呼吸道 冠状病毒缺失片段表达产物的反应原性比较 杨乐乐1，郭福生2，孙淑芳2，吴斌1，陈焕春1 (1．华中农业大学动物医学院，湖北武汉430070； 2．农业邸动物检疫所，山东青岛266032) 因缺失B、c两个主要抗原位点。因此，利用RT—PCR技术分别扩增TGEV western 别诊断，为进一步研制开发TGEV和PRCV的鉴别诊断试剂盒奠定了基础。 关键词：TGEV；PRCV；S基因；克隆表达；鉴别诊断 文献标识码：A 文章编号：1000—8721(2005)05—0384—05 中图分类号：S852．65 猪传染性胃肠炎(transmissiblegastroenteritis， TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的猪 的一种高度接触性传染病，不同年龄和品种的猪都 易感，尤其以仔猪最易感，两周龄以内的仔猪致死率 诊断试剂盒奠定了基础。 可高达100％。目前该病已遍布全世界各养猪国 家，给养猪业造成了严重损失L1，2j。TGEV主要编 弑料与贺法 码S(纤突蛋白)、M(膜结合蛋白)、N(核蛋白)、sM 1病毒、菌株、载体与阳性血清TGEVPurdue毒株由农业 (小膜蛋白)四种结构蛋白_3j。其中，由S基因编码 的S蛋白是唯一能诱导机体产生中和抗体的结构蛋 部动物检疫所提供。E．coli 白HJ。目前，国内外的大量研究表明，在S基因的 vector 室保存。pGEM—T System 近N端包含了四个主要的抗原决定位点A、B、C、D， 司。 J。 其中诱导中和抗体产生的主要是A位点’5 2酶及主要试剂 M—MLV、Taq coron— 猪呼吸道冠状病毒(porcinerespiratory DNA avirus，PRCV)发现于20世纪80年代早期，常和其 000、DL2000 polymerase、DLl5 它的呼吸道疾病发生混合感染而引起猪呼吸系统综 公司；DNA凝胶回收试剂盒购自上海生工。羊抗猪IgG— 合症，常年不断发病，使猪成批死亡。TGEV和HRP购自SBA公司。 3 PRCV在结构上非常相似，同源性达到96％以上， 目的片段的扩增和克隆 常规的血清学检测方法具有交叉反应，不能将它们 3．1 引物设计 区分开怕J。但是，PRCV的S基因不存在B、C两个 S基因近N端约680bp片段， 抗原位点E7]。基于此点，在本实验中我们利用原核 和s1_2。其中s1片段含TGEV