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兰州大学基础医学院;基本概念 克隆动物的发展简史 胚胎核移植技术 体细胞核移植技术 动物克隆技术的应用前景;几个基本概念;★ 核移植：是指利用显微外科手术的方法将胚胎细胞或成体细胞的细胞核移人去核的卵母细胞中，构建成重组胚，通过体内或体外培养、胚胎移植，产生与供体细胞基因型相同的后代的技术过程，又称为动物克隆技术 ★ 根据核供体的来源不同，可将其分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植 ★ 通常所说的动物克隆指体细胞克隆，即动物的无性繁殖;? 动物克隆：是一种通过核移植过程进行无性繁殖的技术。发育早期的动物胚胎细胞，或成年动物的体细胞，经显微手术移植到去掉细胞核的卵母细胞中之后，在适当的条件下，可以重新发育成正常胚胎，移植到生殖周期相近的母体之中，可以发育成为正常动物个体。经过核移植而产生的动物，其遗传结构与细胞核供体完全相同 ? 克隆动物：不经过有性生殖过程，而是通过核移植生产的遗传结构与细胞核供体相同动物个体，就叫做克隆动物;? 胚胎克隆：使用的核供体细胞如果来自多细胞阶段的胚胎，叫做胚胎克隆 ? 体细胞克隆：使用的核供体细胞来自动物体细胞，叫做体细胞克隆;动物克隆大事记;动物克隆大事记; 1997年，中国学者孟励在美国用胚胎细胞克隆猴获得成功 1998年，日本科学家Kato等用牛的输卵管细胞得到克隆牛 1998年，美国人Yanagimachi领导的研究小组用克隆鼠的卵丘细胞核作供体，获得了克隆再克隆小鼠 1998年，一个多国联合科学小组用1个人的腿部体细胞与1个奶牛的卵细胞结合，成功克隆了1个人的胚胎，但只“生活”发育了12d就被有意毁掉 1998年～1999年，美国人White用珍稀动物盘羊的体细胞核与牛卵结合；韩国的黄禹锡将白头山老虎体细胞核与牛卵结合；我国学者陈大元将大熊猫体细胞核与兔卵结合，均成功克隆出早期胚胎（异种克隆） 2000年，美籍华裔学者杨向中领导的研究小组利用17岁公牛耳部皮肤的成纤维细胞成功获得克隆牛;■ 2000年，美国科学家成功地克隆出首例灵长类动物——一只恒河短尾猴“泰特拉（Tetra）”。与其它动物克隆不同的是，“泰特拉”未用细胞核移植技术，而是采用胚胎分解的方法，将受精卵培育卵裂至8个细胞时将其分离，每2个细胞分为一部分，共分为4部分，并分别植入4个“代理母亲”子宫中，结果有一个“代理母亲”成功生下了“泰特拉”，这意味着克隆人类已没有技术障碍 ■ 2000年6月22日，我国生物胚胎专家张涌在西北农林科技大学种羊场顺利接生了1只雌性体细胞克隆山羊“阳阳”。“阳阳”经自然受孕后，并于2001年8月8日产下一对混血儿女，雄性叫“欢欢”，雌性叫“庆庆”，都是体细胞克隆山羊“阳阳”与世界首批胚胎克隆山羊交配的后代。“阳阳”的生产可以证明体细胞克隆山羊和胚胎克隆山羊具有与普通山羊一样的生育繁殖能力 ■ 2001年，美、意科学家联手展开克隆人的工作，但遭到国际社会的普遍反对 ■ 2001年，美国宣布首次克隆成功处于早期阶段的人体胚胎;世界上首例克隆马“普罗梅泰亚”（意大利） 后面是它的“母亲兼姐姐”;世界上第一头克隆骡子（美国）;世界第一只克隆猫;克隆兔;克隆狗史努比;上海转基因羊;多莉;克隆人胚胎;细胞核移植技术的基本过程;胚胎细胞核移植技术（胚胎细胞克隆）;1 核受体细胞的准备 ★ 去核卵母细胞常常作为核移植的受体细胞。这是因为在卵母细胞的细胞质含有某种特定的因子，可以使移植核中所含有的基因表达程序发生重新排列，使已经分化了的细胞重新回到发育过程的原点，同受精卵一样开始个体发育过程 ★ 卵母细胞的来源有两种方式：① 用激素对雌体进行超排处理，从输卵管冲出体内成熟的MⅡ卵母细胞。② 从屠宰场收集卵巢，吸出滤泡中的卵丘—卵母细胞复合体(COCs)，在体外培养成熟后作为受体;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;2 核供体细胞的准备 ? 核移植操作中，细胞核供体细胞首先必须是完整的二倍体，该细胞必须保持有供体动物完整的基因组 ? 供体细胞核必须能够在受体细胞质的作用下，产生细胞分化过程的倒转，变得如同刚刚受精的合子一样，能重新完成从受精到发育成一个正常动物个体的全过程 ? 核供体细胞主要有胚胎卵裂球、胚胎干细胞和胎儿成纤维细胞 ;8细胞胚胎分离;3 细胞核移植 常用的核移植方法有两种 ■ 胞质内注射：用一个外径5-8μm 的注核针吸取供体核后直接注射进卵母细胞胞质内的方法 ■ 透明带下注射：供体细胞核注射在透明带与卵母细胞之间的卵周隙中，核移植后用电刺激进行细胞融合;胚胎