第16章 免疫学应用-课件.pptVIP

教学重点： 基于抗原－抗体反应的检测方法及原理；人工（自然）主动免疫、人工（自然）被动免疫的概念。 教学难点： 抗原-抗体反应的特点及影响因素。 主要内容 第一节　基于Ag-Ab反应的检测方法 第二节　免疫细胞的检测 第三节　免疫分子的检测 第四节 免疫学预防 第一节　基于Ag-Ab反应的检测方法 抗原-抗体反应：指抗原与相应抗体在体内、外发生高度特异性结合反应。由于实验所用的抗体存在于血清中，故又称血清学反应（serological reaction) 应用： 用已知抗原检测未知抗体； 用已知抗体检测未知抗原： 定性或定量检测体内各种分子； 用已知抗体检测半抗原物质。 交叉反应（cross reaction）性：若两种抗原分子有一个或数个相同（或相似）的决定基，则针对一种抗原的抗血清可与另一种抗原发生反应。 比例合适： 若抗原、抗体的数量比例合适，抗体分子的两个Fab段分别与两个抗原决定基结合，相互交叉连接成网格状复合体，则反应体系中基本不存在游离的抗原或抗体，此时形成肉眼可见的反应物（沉淀物或凝集物）。因此，确定反应体系中抗原、抗体的最适比例十分重要。 （四）抗原和抗体的性质 抗体的特异性和亲和力是决定抗原-抗体反应的关键因素。 此外，抗原理化性质、抗原决定基多寡和种类等均可影响抗原-抗体反应。 1．直接凝集（direct agglutination) ： 细菌或红细胞与相应抗体直接反应，可出现细菌或红细胞凝集现象。 2．间接凝集（indirect or passive agglutination) ：检测针对可溶性Ag的Ab 3．间接凝集抑制试验 (direct agglutination inhibition test) 4. 协同凝集试验（co-agglutination test） 2、间接凝集 Definition - agglutination test done with a soluble antigen coated onto a particle 1．单向免疫扩散(single immunodiffusion) 2．双向免疫扩散(double immunodiffusion) 3．免疫电泳(immunoelectrophoresis) 4．免疫比浊(immunonephelometry) 单向免疫扩散(single immunodiffusion) 双向免疫扩散(double immunodiffusion) （1）直接荧光法：荧光素直接标记抗体，对标本进行检测。该法优点是特异性高，缺点是检查任一抗原均须制备相应荧光抗体。 （2）间接荧光法：用一抗与标本中抗原结合，再用荧光素标记的二抗进行检测。该法优点是敏感度比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗即可用于多种抗原的检测,但非特异性反应亦增强。 常用的方法如下： （1）酶联免疫吸附试验 (enzyme linked immunosorbent assay，ELISA) （2）免疫细胞或组织化学（immunocytochemistry or immunohistochemistry,ICC or IHC) 间接法图示 ICC 磁珠分选 （二）生物活性测定法 　根据细胞因子特定的生物学活性，借助相应指示系统，如选用各种依赖性细胞株或靶细胞，同时与标准品对照测定，从而得知样品中细胞因子活性水平，一般以活性单位（U/ml）表示。 （三）分子生物学测定法 　具体方法为聚合酶链反应（PCR）、实时定量PCR等。 2、人工免疫（artificial immunization） 即免疫学预防，指采用人工方法，将疫苗、类毒素或含特异性抗体和细胞的免疫制剂接种于人体，以增强宿主的抗病能力。 人工主动免疫 人工被动免疫 人工自动免疫与人工被动免疫的比较 分类： 1、死疫苗（death vaccine）:选用免疫原性强的微生物标准株经大量培养后，用物理或化学方法将其杀死或灭活而制成的预防制剂。如霍乱、百日咳、伤寒、钩端螺旋体疫苗。 优点：主要诱导特异性抗体产生，安全 缺点：不能繁殖，需多次刺激，注射局部和全身反应严重 死疫苗与活疫苗的区别 本章小结 1、掌握凝集反应和沉淀反应的概念 2、掌握免疫细胞和免疫分子常用检测方法的名称 3、掌握人工主动免疫和人工被动免疫的概念 4、了解免疫学方法的研究概况、进展及在临床中的 应用 思考题 1. 你认为抗原-抗体发生结合的分子基础是什么？ 2. 你认为哪些因素可能影响抗原-抗体反应？哪些情况下我们可以肉眼见到抗原-抗体反应？ 3. 抗原-抗体反应结合稳定吗？是共价结合，还是非共价结合？抗原-抗体的反应一定是专一的吗？ 4. 基于抗原