多色荧光原位杂交技术检测急性淋巴细胞白血病复杂核型异常论文.docVIP

　　多色荧光原位杂交技术检测急性淋巴细胞白血病复杂核型异常论文 .freelosomal Aberrations in Acute Lymphoblastic Leukemia by Means of Multiplex Fluorescence in situ Hybridization Abstract This study ed to establish the technique of multiplex fluorescence in situ hybridization (M-FISH) and to explore its usefulness in detection of plex chromosomal aberrations (CCAs) in acute lymphoblastic leukemia (ALL). Five ALL patients onstrated that M-FISH confirmed the aberrations previously detected by CC，such as t(9；22)，t(1；19) and t(y；1)，and revealed nealities as der(1)(1∷3∷7)，der(6)t(6；9)(q?；p13)，der(1)t(1；11)， der(12)t(1；12)，der(3)t(3；5)，der(2)t(2；16)，der(9)(9∷18∷7) and der(7)(9∷18∷7)，and also corrected the ong these abnormalities，der(9)(9∷18∷7) and der(7)(9∷18∷7) e. In conclusion，M-FISH has proved to be useful in characterization of the CCAs in ALL，and it is an essential method to refine the karyotype analysis. Key ultiplex fluorescence in situ hybridization；acute lymphoblastic leukemia；plex chromosomal aberration 伴随血液系统疾病-FISH）技术［1］则可以有效的解决上述难题。M-FISH技术在国外开展应用相对较多，但国内仅有赵萌等［2］应用 M-FISH 技术检测了2例急性白血病患者的核型异常。 我们应用M-FISH技术对5例伴有复杂核型异常（plex chromosomalberrations，CCAs）的急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）病例进行了检测，以探讨该技术在检测ALL复杂核型异常中的应用。 材料和方法 研究对象 5例ALL患者，男4例，女1例，诊断和分型根据细胞形态学、细胞化学染色、多参数流式细胞术免疫分型和染色体核型分析确定，出现的染色体异常累计2个以上染色体和（或）3个以上断裂位点。１例正常男性作为对照。 细胞遗传学分析 采用骨髓短期培养法，按常规制备染色体。应用R显带技术进行核型分析，核型异常按《人类细胞遗传学国际命名体制（IS）1995》加以描述。 M-FISH分析 M-FISH 探针为 Vysis 公司提供，以联合标记的方式共标记SpectrumAquaTM、SpectrumGreenTM、SpectrumGoldTM、SpectrumRedTM、 SpectrumFRedTM 5种荧光素，用SpectraVysion 分析系统分析可得出24种不同的色彩分别标记于每一条染色体上。 M-FISH的具体步骤 ①取出储存于-20℃的染色体标本，气干法滴片，自然干燥后放入37℃ 2×SSC中老化30分钟；② 分别用RNA酶、胃蛋白酶及甲醛消化处理玻片，具体时间随玻片上细胞多少及胞浆多少而定，用相差显微镜观察确定；③ 72℃、70%甲酰胺/2×SSC变性玻片2分钟，室温乙醇梯度脱水待干；④ 取出10 微升/1张玻片量的探针，72℃水浴5分钟；⑤加探针10 μl于玻片上，上盖22 mm×22 mm盖玻片，四周封胶，放入湿盒中37℃杂交12-18小时；⑥第2天，取出玻片，揭去盖玻片，放入72℃ 0.4×SSC/0.3% TGoldTM、SpectrumFRedTM 、SpectrumAquaTM、SpectrumRedTM和SpectrumGreenTM滤光片下采集5种荧光素的原始图象，软件分析合成最后的分类图象，即每一条染色体被赋予一种伪彩（共24色），每一份标本均采集约20个分裂象。 结 果 5例AL