分子生物学第二章DNA结构与复制-课件.pptVIP

（3）复制子水平调控 决定复制的起始与否。这种调控从单细胞生物到高等生物是高度保守的。 此外，真核生物复制起始还包括转录活化、复制起始复合物的合成和引物合成等阶段。许多参与复制起始蛋白的功能与原核生物中相类似 2.5 DNA的修复 一个物种能够一代一代地遗传下去，是因为DNA能够稳定复制。如果DNA不能稳定地复制，那么，物种就不存在了。但，在进化过程中，受到各种因素的影响，导致DNA复制的差错或碱基突变，使生物具有多样性。 DNA复制过程中，发生的差错，可以引起突变。同时，还会受到一些化学反应、物理反应、生物反应造成DNA分子损伤，引起DNA突变。 DNA突变的主要因素 碱基脱落: 形成AP位点；碱基的改变; 电离辐射等物理因素；硫酸二甲酯、甲烷磺酸甲酯等化学因素；：DNA病毒和RNA病毒感染、质粒转移、基因重组、转座子的转位等生物因素均能使DNA发生突变。 1. 错配修复 经错配修复系统识别新合成链中的错配并加以校正。 （1）发现碱基错配; （2）在水解ATP作用下, MutS、MutL与碱基错配位点的DNA双链结合；（3）MutS-MutL在DNA双链上移动，发现甲基化DNA后由MutH切开非甲基化的子链。 2. 切除修复 （1）碱基切除修复 研究发现，所有细胞中都有不同类型的能识别受损伤核苷酸位点的糖苷水解酶，它能特异性切除受损核苷酸上的N-β-糖苷键，在DNA上形成去嘌呤或去嘧啶位点，成为AP位点。 DNA糖苷水解酶具有特异性，如尿嘧啶核苷水解酶能特意性识别DNA链中胞嘧啶自发脱氨形成的尿嘧啶。 AP核酸内切酶能切开损伤核苷酸的糖苷-磷酸键，移去包括AP位点核苷酸在内的DNA小片段，DNApolyI合成新的片段，DNA连接酶连接。 脱氨基反应 脱氨基反应 （2）核苷酸切除修复 DNA切割酶 3. 重组修复或复制后修复 机体细胞对在复制起始时尚未修复的DNA损伤部位可以先复制再修复，即先跳过该损伤部位，在新合成链中留下一个对应于损伤序列的缺口。 4. DNA的直接修复 将损伤的碱基回复到原状态的一种修复系统。 DNA光解酶将在紫外线照射形成的环丁烷胸腺嘧啶二体及6-4光化物还原成为单体的过程。 O6-甲基转移酶从O6-甲基鸟嘌呤核苷酸中移去甲基，以防止形成G-T的配对。 5. SOS修复 SOS反应是国际上通用的紧急呼救信号。SOS修复是指DNA受到严重损伤、细胞处于危急状态时所诱导的一种DNA修复方式，修复结果只是能维持基因组的完整性 。 SOS修复是在DNA分子受到重大损伤时诱导产生的一种应急反应，它使细胞内源修复酶合成量增加，甚至产生新的修复酶来修复损伤的DNA。 LexA蛋白是一种阻遏蛋白，在正常情况下，阻遏SOS系统各种基因的大量表达。 在正常情况下，umuC和umuD基因被LexA阻遏。当DNA受损时，LexA子体切割后，解除阻遏作用。umuC和umuD基因表达。 当RecA结合并促进LexA自体切割时，也促进umuD的子体切割，称为umuD’子切体。随后，umuC和umuD’蛋白帮助DNApolⅢ跨过损伤而完成染色体DNA的复制和细胞分裂。 （3）某种蛋白启动复制 腺病毒DNA分别在分子两端启动复制，并通过链取代法使之延伸。 末端蛋白的作用下，在真正的末端上启动复制。 （1）θ-复制 （2）滚环复制 （3）D-环复制 2.环状DNA的复制 （1）θ-复制 E.coli基因组的复制原点位于天冬酰胺合酶和ATP合酶操纵子之间，全长=45 bp，称为oriC。OriC富含AT，并含有多个短的重复序列，能够被复制起始点结合蛋白所识别。复制的起始： 涉及DNA双链的解旋和松开，形成两个方向相反的复制叉。前导链还是复制前，复制原点的核酸序列被转录生成短的RNA链，作为起始DNA复制的引物。 （2）滚环复制（replication by rolling cycles structure） 这是单向复制的一种特殊形式。φX174噬菌体由一个单链环状DNA组成，这条链称为正（+）链；合成的互补链称为负（-）链。双链体的复制以滚环复制方式进行。 (3)D-环型（D-loop）： ? 这也是一种单向复制的特殊方式。这种方式首先在动物线粒体DNA的复制中被发现。双链环在固定点解开进行复制。但两条链的合成是高度不对称的，一条链上迅速合成出互补链，另一条链则成为游离的单链环（即D-环）。 2.4 DNA复制的特点 2.4.1 原核生物E. coli