慢性阻塞性肺疾病肺气虚证和肺阴虚证患者T淋巴细胞相关基因表达对比研究论文.docVIP

　　慢性阻塞性肺疾病肺气虚证和肺阴虚证患者T淋巴细胞相关基因表达对比研究论文 .freelus-dependent lymopholyte of the COPD patients onary qi deficiency syndrome (PQDS) and pulmonary yin deficiency syndrome (PYDS) by gene chips. Methods Collect peripheral blood of patients ental samples) and of nomal man (as control samples). By Ficoll method, peripheral blood lymphocyte us-dependent lymphocyte etry. Total RNA plate from total RNA, transcription of cRNA probe ple ented. The gene chip (Human Genome U133 Plus 2.0 Array, 38500 genes) ong PQDS and normal man, including up-regulated 41 and doal man, including up-regulated 19 and doal man. Conclusion Gene chip can be applied to study gene expression profiles effectively and to screen PQDS and PYDS associated genes. Key onary disease；pulmonary qi deficiency syndrome；pulmonary yin deficiency syndrome；thymus-dependent lymphocyte；gene expression；gene chip 慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种具有气流受限特征的肺部疾病,气流受限不完全可逆,呈进行性发展。肺气虚证是以肺功能减退为主要特征的全身多系统、多脏器功能障碍的综合征,肺气虚证可进一步发展为肺阴虚证并直接影响COPD的发生和发展,且贯穿于COPD的整个病程之中。肺气虚证和肺阴虚证能比较集中反映“肺”的各种生理功能不足表现的综合证候群,继往研究证实肺气虚证和肺阴虚证都存在T淋巴细胞免疫功能下降1。为明确COPD肺气虚证和肺阴虚证的T淋巴细胞相关基因的变化,本课题通过基因芯片技术对其基因表达差异进行分析和对比研究。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 试剂 CD3抗体(FITC Conjugate Caltag laboratories)；淋巴细胞分离液(Cedarlane Laboratories Ltd.,比重1.077±0.001)；TRIzol Reagent(Invitrogen Life Technologies)。 1.1.2 芯片 Affymetrix人类全基因组表达谱芯片(Human Genome U133 Plus 2.0 Array)和质控芯片(TEST3)。 1.1.3 主要仪器 流式细胞仪(美国Beckman Coulter公司)；Affymetrix Hybridization Oven 640；Affymetrix GeneChip Scanner 3000。 1.2 方法 1.2.1 标本来源 实验组：选择肺气虚证(符合《中药新药临床研究指导原则》2肺气虚证诊断标准)患者4例,男性,年龄40～50岁,平均(45.3±4.5)岁,病程6～15年,平均(10±3.2)年；对照组：肺阴虚证(符合《中医诊断学》3中肺阴虚证标准)患者4例,男性,年龄43～55岁,平均(46.7±3.2)岁,病程9～17年,平均(12±5.9)年。西医确诊为COPD4。所有患者均经安徽中医学院第一附属医院名医堂主任医师逐一辨证审核。4名健康查体者为健康对照组,男性,年龄40～50岁,平均(42±1.2)岁,所选患者与健康者无血缘关系。 1.2.2 标本采集与T淋巴细胞分选 按病例编号,每组患者各采取外周静脉血10 mL,EDTA抗凝,均分成3管,用等量无RNA酶的PBS稀释后,在无菌条件下采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核淋巴细胞(严格按说明书操作),回收细胞,立即加入CD3抗体,闭光保存10 min,采用分选式流式细胞仪进行T淋巴细胞分离。 1.2.3 总RNA提取、纯化 用TRIzo提取总RNA(严格按说明