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(1)蛋白质的水解 蛋白质可被酸，碱和蛋白酶催化水解，使蛋白质分子断裂，分子量逐步变小，成为分子量大小不等的肽段和氨基酸。 水解分完全水解与不完全水解。 完全水解是在5.7mol/L盐酸中于110°C高温20小时可完全变成氨基酸。 不完全水解是在酶或稀氨酸较温和的条件下进行，水解产物有肽段与氨基酸。 由共价键破坏引起的不稳定性 大学便民网 / (2)蛋白质的氧化 蛋白质中具有芳香侧链的氨基酸可以在一些氧化剂作用下氧化。 常用氧化剂有分子氧、过氧化氢、过甲酸、 氧自由基等。 影响氧化的因素有温度、pH、缓冲介质、催化剂的种类和氧的强度。 疏基的氧化在碱性条件，特别在金属离子的存在下容易发生。 蛋白质的立体排列可以影响氧化反应及其结果，氧化的巯基暴露在蛋白质表面，接着形成分子间的二硫键导致蛋白质聚集。 由共价键破坏引起的不稳定性 大学便民网 / 大学便民网 / 大学便民网 / 目前常用的凝胶包括3个主要类型： 1.Poly dextran （交联葡聚糖凝胶）? Polydextran的商品名称是Sephadex，它几乎 不溶于溶剂中，亲水性强，能迅速在水和电解质溶 液中膨胀，在碱性的环境中十分稳定，所以可以用 碱去除凝胶上的污染物。Sephadex依其吸水量有不 同型号，如 G-25、G-75、G-100或是G-200，G 后 面的数字为凝胶吸水量再乘以10，以G-25为例，表 示1克干燥的G-25凝胶可以吸水2.5 ml 。 大学便民网 / ?2.??Polyacrylamide （聚丙烯酰胺凝胶） Polyacrylamide是一种合成凝胶，商品名Bio-Gel P，干粉颗粒状，在溶剂中自动溶成胶体，依胶的分 离范围不同，分成Bio-Gel P-2至Bio-Gel P-300，P后 面的数字乘以1000为最大过滤限度。 Polyacrylamide的化学性质不活泼，但它在极端 的pH 下会被水解，水解后产生的COOH-具有离子交 换的性质，因此pH 值应尽量控制在2-10之间。 大学便民网 / 3.?Agarose（琼脂糖凝胶） 商品名Sepharose，属于天然凝胶，依凝胶中干 胶的百分含量，分为Sepharose 2B，4B和6B。 Agarose gel 是一种大孔凝胶，主要用于像核酸 或病毒这些分子量400,000以上的物质，因其颗粒 软，在分离过程有时会阻塞管柱，造成流速减慢， 又因其在摄氏50度以上会融化，故需于较低温的环 境中进行层析。Agarose 做成beads后不能再脱水干 燥，所以要在湿态中保存。 大学便民网 / 凝胶颗粒的粗细与分离效果有直接关系，颗粒细 的分离效果好，但流速慢而费时，因此要依据实际 的需要来选择。对于分子量较小的物质，一般采用 polydextran或polyacrylamide材质的凝胶，大分 子物质则使用agarose。? 以Sephadex为例，Sephadex G-50可用于区分分 子量1,500~30,000之分子，而Sephadex G-75 凝胶 可区分分子量3,000~70,000之分子，所以若要分离 分子量10,000及20,000之分子，两种都适用。 大学便民网 / 如果要分离的分子大小相差很多，则可选用柱 高：直径＝5：1~15：1的管柱，且管柱体积要大于 4~15倍的样品体积；如果要分离的物质之间分子量 差异不大，则要选用柱高：直径＝20：1~100：1的 管柱，且管柱体积要大于25~100倍的样品体积。 大学便民网 / 将凝胶装入管柱的方法有很多种，常用的方法是 先在柱中加入约1/3 体积的冲洗液，边轻轻搅伴边 将凝胶悬浮液倒入其中，等到底部沉积约1~2公分的 凝胶后，打开下方出口让水流出，上面不断加入悬 浮液，等到沉积到离顶部约3~5公分处停止，让3~5 倍柱床体积的缓冲液流过层析柱。 大学便民网 / 冲洗缓冲液仅需留高于柱床2 公分左右，多余的 可用滴管吸去，再将出口打开使冲洗液流到距表面 1~2公厘，关闭出口，用滴管缓缓加入样品再打开出 口，样品完全渗入凝胶内后，加入约4公分冲洗液， 出口处接上收集瓶开始层析。 大学便民网 / 由于polydextran 和agarose都属于多醣类，一 旦微生物生长过多，分泌的酶会水解凝胶使其性质 改变，为了防止这种情况发生，凝胶最好采用真空 或低温保存，但温度不能过低使凝胶冻结。加入抑 菌剂（也是常用的方法。长时间不用的凝胶可用干 燥保存法，也就是把使用过的凝胶用水除去碎颗粒 和杂质，再用不同浓度的酒精，由70%、90%到95%逐 步脱水，在摄氏60~80