单倍体的产生.pptVIP

14.单倍体的产生 所谓单倍体，指的是具有配子体染色体组成的孢子体。 单倍体在遗传研究和植物育种中的意义在于： 1、单倍体是体细胞遗传研究和突变育种的理想材料。 2、可显著缩短了育种年限。 7．2 通过花药培养产生单倍体的潜在可能性 1、单核小孢子进行一次不对称的有丝分裂，形成一个小的生殖细胞和一个大的营养细胞。前者起初紧贴在花粉粒的内壁上，但最后变为游离在营养细胞的细胞质中。以后生殖细胞又分裂一次，形成两个精子，而营养细胞则保持静止。 2、在某些被子植物中，作为一种异常现象，单核小孢子的核连续分裂3次， 形成一个类似8核胚囊(雌配子体)的结构，被称为“花粉胚囊”。 3．在曼陀罗和烟草中，幼龄小孢子在天然条件下可能十分接近发育途径转变的临界点，因此只要把花药从花蕾上摘下来，放在蔗糖—琼脂培养基上，就能在小孢子内诱导一种完全不同的发育形式：在原来的花粉粒的壁内连续发生多次细胞分裂，形成一个多细胞的结构，然后在含有无机盐的培养基上，分化成为一个胚状体。胚状体萌发后，形成一个雄性起源的单倍体孢子体。 4．如果小孢子发育为雄配子体的潜力受到干扰和破坏之后，又没有被上述2种异常发育潜力所取代，即既没有发育成花粉胚囊，也没有发育成胚状体，这时小孢子就会通过不断的细胞分裂而形成愈伤组织。然后，在适宜的培养条件下，愈伤组织再通过胚胎发生或器官发生途径形成植株。 7.3 花药培养的一般程序 7.3.1 取材 花药在接种以前，应预先用醋酸洋红压片法进行镜检，以确定花粉的发育时期，并找出花粉发育时期与花蕾或幼穗的大小、颜色等外部特征之间的对应关系。 7.3.2 预处理 常用的预处理方法是低温冷藏。 7.3.4 消毒 通常只要以70％酒精喷洒或擦拭花器或包被着麦穗的叶 鞘表面，即可达到灭菌要求。 7.3.4 接种 在无菌条件下把雄蕊上的花药轻轻地从花丝上摘下，水平地放在培养基上进行培养，在整个操作过程中不应使花药受到损伤，若受损伤，则应淘汰，因为损伤常常会刺激花药壁形成二倍体愈伤组织。 7.3.5 培养方式和培养条件 一是在琼脂固化培养基表面培养，二是在加人30％Ficoll的液体培养基表面飘浮培养，三是利用固体—液体双层培养基培养， 以便既能保持较高的接种密度，培养基又不易失水干涸。 7．3．6 花粉植株的诱导 烟草花药接种在无激素培养基上l周以后，即有部分花粉粒开始膨大，2周以后细胞开始不断分裂，相继形成球形胚、心形胚和鱼雷形胚等，3周后在花药开裂处即可见到许多淡黄色的胚状体，见光后变绿，并逐渐长成小苗。每个花药中长出的小苗数可从1株到几十株不等，最多者可达180株以上。 禾本科植物花粉植株的诱导往往要分两步进行 首先，第一步，将花药接种在含有2，4—D(1～2mg／L)的诱导培养基上，诱导花粉粒形成单倍体愈伤组织。然后，第二步，当花粉愈伤组织形成后10—15d，其直径已长到L 5～2．0mm时，及时把它们转到分化培养基上诱导植株分化。分化培养基中不含2，4—D，含有NAA和KT各0.5mg／L。在分化培养基上，愈伤组织表面陆续分化出芽和根。 7．3．7 壮苗和移栽 以小麦为例，王培等采用的方法是：将已长出2～3片叶的花粉植株转入含有多效唑3mg／L，NAA和KT各0．5mg／L,LH 500mg／L和蔗糖8％的MS培养基上，于22～25℃下进行壮苗培养，然后在3—8℃低温弱光条件下越夏，深秋时炼苗移栽。 7.3.8 单倍体植株的二倍化 诱导染色体加倍的传统方法是用秋水仙素处理。在烟草中一般使用o．4％的秋水仙素溶液。 具体方法是：把幼小的花粉植株浸于过滤灭菌的秋水仙素溶液中96h，然后转移到培养基上使其进一步生长。 7.4 影响雄核发育的因子 7.4.1 基因型 基因型是影响花药离体培养反应的重要因子之一。 7.4.2 生理状态 一般来说，幼年植株的花药反应能力较好。在开花末季采集的花药不但形成孢子体的频率很低，而且发生反应的时间也较迟。在水稻和小麦等禾谷类植物中，大田植株比温室植株、主茎穗比分蘖穗花粉愈伤组织的诱导率高。 7.4.3 花粉发育时期 表7．1 在毛曼陀罗花药培养中花粉发育时期对花粉植株形成的影响 7.4.4 药壁因子 即使把一个品种烟草的花粉移植到另一个品种的花药中，前者也能够顺利地发育成胚。通过这项工作建立了一个“药壁因子”的概念。 花药对同一物种及不同物种离体花粉雄核发育的看护作用。 花药浸提液也能刺激花粉胚的形成。 在曼陀罗离体小孢子培养中，用谷氨酰胺、丝氨酸和m—肌醇三者一起可以取代药壁因子的作用，而在烟草花粉培养中，只用谷氨酰胺即能取代这种作用。 由绒毡层起源的某些重要物质的梯度变化，对于诱导花粉粒发育