癌肿瘤遗传学—培训课件.ppt

* RNAi的应用前景 1. 研究基因功能的新工具 2. 研究信号传导通路的新途径 3.开展基因治疗的新策略 * 1. 研究基因功能的新工具  已有研究表明RNAi能够在哺乳动物中灭活或降低特异性基因的表达，制作多种表型，而且抑制基因表达的时间可以随意控制在发育的任何阶段，产生类似基因敲除的效应。 RNAi将大大促进对这些新基因功能的研究。与传统的基因敲除技术相比，这一技术具有投入少，周期短，操作简单等优势，近来RNAi成功用于构建转基因动物模型的报道日益增多，标志着RNAi将成为研究基因功能不可或缺的工具。 * 2. 研究信号传导通路的新途径 联合利用传统的缺失突变技术和RNAi技术,可以很容易地确定复杂的信号传导途径中不同基因的上下游关系，Clemensy等应用RNAi研究了果蝇细胞系中胰岛素信息传导途径,取得了与已知胰岛素信息传导通路完全一致的结果. 在此基础上分析了DSH3PX1与DACK之间的关系, 证实了DACK是位于DSH3PX1磷酸化的上游激酶. RNAi技术较传统的转染实验简单、快速、重复性好，克服了转 染实验中重组蛋白特异性聚集和转染效率不高的缺点， 因此认为RNAi技术将可能成为研究细胞信号传导通路的新途径。 *  3.开展基因治疗的新策略 RNAi具有抵抗病毒入侵，抑制转座子活动，防止自私基因序列过量增殖等作用，因此可以利用RNAi现象产生抗病毒的植物和动物，并可利用不同病毒转录序列中高度同源区段相应的dsRNA抵抗多种病毒。 肿瘤是多个基因相互作用的基因网络调控的结果，传统技术诱发的单一癌基因的阻断不可能完全抑制或逆转肿瘤的生长, 而RNAi可以利用同一基因家族的多个基因具有一段同源性很高的保守序列这一特性, 设计针对这一区段序列的dsRNA分子，只注射一种dsRNA即可以产生多个基因同时剔除的表现，也可以同时注射多种dsRNA而将多个序列不相关的基因同时剔除。 * ※§ 表观基因组学/遗传学 在不影响DNA序列的情况下对其修饰,不仅影响个体的发育而且可遗传. 如:一卵双生在同一环境中生,成年后表现出性格、健康等方面的差异----表观遗传。 经典的遗产物质--核酸（DNA）储存和传递遗传信息。 表观遗传修饰也可记忆、遗传，向传统的遗传规律提出挑战。 * DNA甲基化----表观遗传 DNA甲基化一般指构成DNA的四个碱基之一的胞嘧啶发生异常，从而导致基因活性发生变化，即基因被“打开”或“关闭”。这种变化容易诱发癌症等疾病。绘制出的DNA甲基化图谱将可能用于诊断疾病，甚至能在基因突变前预测人患癌症的风险性。 而科学家认为，大约一半的人类疾病可归咎于基因，而另外一半则与非遗传因素有密切联系，其中表遗传因素又占据非遗传因素的一定比例。至于DNA甲基化，它只是表遗传因素中较重要的一种。 * DNA甲基化仅限于CpG双核苷酸（人DNA约3%胞嘧啶甲基化），CpG在胞嘧啶甲基转移酶作用下，加-CH3到胞嘧啶5C原子上，形成5-甲基胞嘧啶，其化学上不稳定并易于脱氨基形成胸腺嘧啶(T)。 * * 5— CpG — 3 甲基转移酶 5— CmpG — 3 3‘— GpC — 5’ 　 3‘— GpCm — 5‘ 甲基化后复制 5‘— CmpG — 3’　 DNA复制 　 　　 3‘— GpC— 5‘ 　 　　　　　　　　 甲基化后脱氨基及复制　　　 5‘—CmpG — 3’ 　去氨基 　5— TpG — 3‘ 3‘－GpCm — 5’ 　　　 3—GpCm —5 5‘— TpG — 3‘ DNA复制’ 3‘—ApCm —5’ 　　　 * 如：肿瘤组织中DNA常有异常甲基化作用。 甲基化→→激活癌基因。 另一方面，可使TSG 5’端启动子调控区CpG岛异常甲基化，而抑制mRNA转录作用，导致TSG 失活。 * 癌的多阶段演化 5chr LOH DNA低甲基化 正常结肠细胞 C生长增强 早期腺瘤 APC