8七章外源化学物致突变作用8-2.pptVIP

第七章外源化学物致突变作用 ;案例3分析讨论;第四节  机体对致突变作用的影响;遗传物质在外源性因素的损伤仍能代代相传的原因：;一、DNA损伤的修复;（二）碱基切除修复; （三）核苷酸切除修复 　使细胞具有从DNA上移除较大损伤。 　所有生物体最常见的修复机制。基本可以修复所有种类的DNA损伤。 过程：内切酶， ①损伤识别；②损伤两侧切除损伤链；③切除寡聚核苷酸；④修复合成填补产生的缺口；⑤DNA连接酶封闭，恢复原有DNA序列。 　 ;（四）双链断裂修复; （五）交联修复： 当细胞内发生DNA链内交联，会造成双链的断裂，机体启动无误交联修复或易误交联修复。;小结;二、遗传因素对致突变作用的影响;（二）修复功能的个体差异;小 结;第五节 观察外源化学物致突变作用的基本方法***;致突变试验的应用;检测化学物的致突变性的目的：;一. 观察项目的选择 （一）观察的效应终点类型 遗传学终点(genetic endpoint )： －基因突变和染色体畸变的检测可直接反映外源化学物的致突变性，是评价化学物致突变性唯一可靠的方法。有许多试验所观察到的现象并不反映基因突变,染色体畸变和染色体分离异常,而仅反映致突变过程中发生的其他事件。因此，将试验观察到的现象所反映的各种事件统称为遗传学终点。 包括：基因突变，染色体畸变，染色体组畸变，DNA原始损伤 ;（二）成套观察项目 1.原则 ① 选择的遗传毒性试验应包括每一类型的遗传学终点。 ② 应包括多种进化程度不同的物种,如原核细胞,低等和高等真核细胞。 ③ 体内试验与体外试验配合。 ;2. HIC(1997)对于药品的遗传毒性评价建议的实验组合为：;二、常用的致突变试验细菌回复突变试验微核试验染色体畸变分析姐妹染色单体交换试验果蝇伴性隐性致死试验显性致死试验程序外DNA合成试验单细胞凝胶电泳;(一)细菌回复突变试验－Ames试验***; (一)细菌回复突变试验－Ames试验*** 1. 原理： 是人工诱变的突变株在组氨酸操纵子中有一个突变，突变的菌株必需依赖外源性的组氨酸才能生长，而在无组氨酸的选择性培养基上不能存活。致突变物可使其基因发生回复突变，使它在缺乏组氨酸的培养基上也能生长。计算诱发的回复菌落数即可判断化学毒物的致突变性。 ; 2. 常用菌株：鼠伤寒沙门菌组氨酸缺陷型突变株为指示微生物。目前推荐使用 TA100 TA102 TA97 TA98 为增强对诱变物的敏感性加入一些附加突变：;(一)Ames试验 3. 方法： 点试法：用作定性试验，适用于短期大量筛选 ; 平板掺入法：标准试验，用作定量测定 ;(二)微核试验(micronucleus test, MNT) 观察受试物产生微核发生率或 有微核的细胞率为观察指标检测 化学物染色体损害能力的试验， DNA断裂剂，非整倍体诱变剂。 微核（micronucleus） ：染色体或染色单体的无着丝点断片或因纺锤体受损伤而丢失的整个染色体，在细胞分裂的后期仍留在子细胞的胞质内，单独形成一个或几个规则的次核，包含在子细胞的胞质内，比主核小。; 正常细胞、微核细胞 ; 正常细胞、微核细胞和核异常细胞 ;骨髓多染红细胞微核试验;骨髓细胞微核试验的不足;微核实验进展;(三)染色体畸变分析chromosome aberration assay;常染色体异常;三体综合征（13三体）：严重的眼，脑，循环系统缺陷以及腭裂。儿童生活很少超过几个月。;(四)姐妹染色单体交换试验(sister-chromatid exchange,SCE) 指染色体同源座位上DNA复制产物的相互交换,其频率与DNA断裂和修复有关。检测DNA损伤的灵敏指标。;(五)果蝇伴性隐性致死试验;(六)显性致死试验 1. 原理 对雄性动物染毒，观察一个精子发育周期中各个阶段雌鼠出现受精卵在着床前死亡和胚胎早期死亡。 致突变物引起哺乳动物生殖细胞染色体发生结构和数目变化。 2.检测整体哺乳动物生殖细胞遗传性（染色体畸变）损伤的方法。是评价化学毒物对雄性动物的生殖细胞遗传毒性较好的方法之一。;（七）程序外DNA合成试验(unschedule DNA synthesis， UDS);*;几种遗传毒理学试验的哺乳动物性细胞致突变物筛检可靠性评价;常用的遗传毒理学试验的特点;（九）观察方法的新进展（自学） 1.转基因小鼠致突变检测系统 2.微核自动化检测技术