柱效测定以及影响因素.PDF

柱效测定以及影响因素 柱效（column efficiency ）是色谱柱在色谱分离过程中主要由热力学因素(操作参数)所决 定的分离效能。通常用理论塔板数、有效塔板数、理论塔板高度、有效塔板高度等表示。 柱效 是衡量色谱柱性能的一项主要指标，柱效越高，分离能力越强 。 折合的塔板高度 h=HETP/d/P 对称性 As 度 浓 **达到最大峰高的时间（或洗脱体积）所对 质 物 踪 半峰高峰宽Wh 应的停留时间（停留体积）。 示 时间 （洗脱体积V ） 停留时间（停留体积） 相对峰宽通常用理论塔板（N），理论塔板 数 （HETP）或折合为塔板高度（h）来迚行 描述： ( ) σ σ ( ) 对称因子 As 描述了与理想高斯峰形状的偏 差，通过对 10%峰高处的峰宽迚行计算得到： 术语 塔板数 N 平均停留时间* μ1 方差* σ 2 停留时间** tR 停留体积** VR 半峰高峰宽 Wh 床高 L 颗粒半径 d/P 理论塔板数 HETP 最佳柱效 对于生物过程色谱中使用的有孔介质，其最佳柱效时实验测定的塔板高度 h 小于等于 3。就峰的对称性而 言，理想对称性为接近 As=1。当工作中折合塔板高度 h ≤ 3 时，一般能接受的范围通常在 0.8-1.8 之间 。需要谨记 的是以柱宽而言，柱效越低通常意味着峰对称性越好 。或者以 N/m （每米的理论塔板 ）来表示，对于不同颗粒大小 的填料，达到以下的数值，即可认为柱效比较好： 颗粒大小（ μm） 介质实例 N/m As 15 SOURCE™ 15 ~20000 0.8~1.5 30 SOURCE 30 ~11000 0.8~1.5 34 Sepharose High Performance, 〉10000 0.8~1.8 Superdex™，Superose 〉10000 0.7~1.3 50 Sephacryl™ ~9000 0.8~1.5 75-100 Sepharose Fast Flow, ~3000 0.8~1.5 Sepharose XL，