第7章-1基因的表达调控-原核精简版.ppt

当细胞利用葡萄糖时，分解产物抑制酰苷酸环化酶的活性并活化磷酸二酯酶，细胞内的cAMP水平下降，CRP没有活性，Lac操纵子不能启动转录，当葡萄糖水平下降，细菌利用乳糖时，cAMP水平提高，CRP有活性，引起操纵子结构基因的转录。 CRP(CAP)对Lac操纵子的作用 结论：乳糖操纵子是一个双因子调节系统 乳糖操纵子的表达需要2个调节蛋白的共同参与，一个是正调节蛋白CRP（CAP），一个是负调节蛋白（阻遏蛋白）。 当阻遏蛋白解除后,没有CRP,基因也几乎不转录 当只有CRP而阻遏蛋白没有解除时,基因不转录 只有当阻遏解除且CRP存在时，基因才开始转录 遗传和生化实验已证实乳糖操纵子的正确 如操纵基因突变，导致阻遏蛋白无法与之结合，操纵子处于无阻遏状态，成“组成型表达” 阻遏蛋白基因LacI突变，导致阻遏蛋白失活或缺乏，操纵子的结构基因转录也处于组成型表达状态。 还有一种突变，使得阻遏蛋白结构变化，失去与诱导物乳糖的结合位点，结果使操纵子处于“不可诱导状态”。 受一种调节蛋白控制的几个操纵子构成的调节系统叫做调节子。 调节子(regulon) 调节子是一种大范围内的基因表达控制调节手段。 受到降解物阻遏 调节的的酶类除了代谢乳糖的酶类外，还有分解半乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖等的酶，这些操纵子都受到CRP的调节，属于一个“调节子”。这样保证在细胞遇到葡萄糖时，所有分解其他糖的酶都不表达，以免造成浪费。 另外，细菌遇到危机情况下有许多基因表达，以便渡过危机时刻。这些基因属于SOS调节子，由基因LexA编码的阻遏蛋白控制。 色氨酸操纵子（Trp operon） 组成和结构：全长约7 kb 调节基因 trpR：与结构基因相距较远，编码阻遏蛋白 操纵基因：位于结构基因的启动子内部，长21 bp 前导序列（leader sequence），162 bp，位于结构基因启动子之后 与结构基因之间，对结构基因的转录起调节作用。 结构基因：5个，负责编码色氨酸合成途径中的3个酶。 Trp操纵子结构基因的转录调控 这里，操纵子结构基因的转录控制是由阻遏蛋白完成，但阻遏蛋白的活性是由色氨酸来激活的，我们把这里的色氨酸称为是一个“辅阻遏物（co-repressor）” 当细菌内含有足够多的色氨酸后，2个分子的色氨酸与2分子的阻遏蛋白结合，激活阻遏蛋白，阻遏蛋白与操纵基因序列结合，阻止转录。当细胞内的色氨酸缺乏时，阻遏蛋白没有活性，结构基因开始转录，细菌开始合成色氨酸。 似乎这个色氨酸操纵子的控制就是这么简单，但是其实不是。 a 当阻遏蛋白没有活性, 结构基因开始转录时,大部分常常只能转录出大约140bp的mRNA就停止了 后来的实验发现…… b 把位于操纵基因后面和结构基因前面的162bp序列中的130-162碱基删除后，trp操纵子的转录水平处于无阻遏的最高水平。 这说明色氨酸 操纵子的结构基因转录还受到其他因素的调控。 Trp 操纵子的衰减调控机制 前导序列（leader sequence）分为4个部分（1-4）：1 为前导区，编码一个14 肽，其中有2个连续的trp，前导序列中 2 和3 互补，3 和4 互补，通过互补，可以形成类似终止序列的结构。 典型的转录终止信号结构 细胞内色氨酸含量高导致结构基因转录终止 细胞内色氨酸含量低导致结构基因转录开始 Animation* 需要注意的几个问题 1、前导肽的翻译只有调节后面基因转录的功能,翻译出来的肽没有其他生理功能! 2、对结构基因转录的控制实际上是通过核糖体在mRNA上停留的位置来实现的。 4、真核细胞中没有这种衰减调节机制，为什么？ 3、阻遏蛋白的调节类似于开关式(on/off)的调节（粗调）;而衰减调节是一种音量开关式的调节（细调），可以使结构基因转录的频率在0－700倍的范围内调节，具体大小与细胞内色氨酸含量的高低以及与之偶联的翻译过程有关。 细菌内许多氨基酸合成的操纵子的调控都是通过衰减子来完成的。 Phe合成的操纵子中有个15肽, 含有7 个phe。 Leu操纵子导肽中含有4个连续的leu。 His操纵子含有7个连续his, 在his操纵子中, 只有衰减调控这一种途径,无阻遏蛋白。 例如 操纵子系统在基因工程中的应用 由于乳糖操纵子中的结构基因的表达可以通过诱导物对其调控。所以乳糖操纵子的结构被用在基因工程中。将结构基因换成外源目的基因，通过往培养基中添加诱导物，外源基因就可以得到表达。 1983年，科学家将细菌乳糖操纵子的启动子的-10区和色氨酸操纵子启动子的-35区组合起来形成一个“杂合” 的启动子，叫做“tac”，这个杂合的启动子启动基因转录的效率比乳糖启动