野生铁皮石斛rDNAITS序列分析.pdfVIP

2012 第十四卷 第五期 ★Vol.14 No.5 DA ITS ＊ 野生铁皮石斛rN 序列分析 □李海霞 黄海波 刘 鹏 黄 松 张桂芳 张丹雁 （广州中医药大学中药学院 广州 510006） 张建 霞 （中国科学院华南植物园 广州 510560） 陈 念 赖 小平＊＊ （广州中医药大学中药学院 广州 510006） 摘 要：目的 ：测定和分析 不同产地野生铁 皮石斛样 品的 rDNA ITS 序 列 ，探讨利 用 ITS 序 列推 测 铁皮石斛样品产地来源的可行性 。方法 ：提取 总基 因组 DNA ，使 用通 用 引物 ITS5F/ITS4R 进行 PCR 扩 增 ，产物 经 电泳检 测 、纯化 和 测序后 用 Sequin 11.0 提 交 GenBank 。用 Bioedit 7.0 中的 Clustal W 对 GenBank 中包括本研究提 交的 11 条在 内的所有 33 条铁 皮石斛的 ITS 序 列进行 多重序 列 比对 ，随后 以 金钗石斛和密花石豆兰为外群 ，用邻接法构建 NJ 系统发 育树 。结果 ：从所有测定的 ITS 序列 中选择 11 条提 交 GenBank ，获得登 录号 JF803235~JF803245 。所有铁皮石斛经比对后共发现 645 个 同源位 点，9 个信 息位点（ITS1 区 3 个 ，5.8 S 区 4 个 ，ITS2 区 2 个）。 系统发 育分析发现 ，金钗石斛和 密花石豆 兰位 于树 的基部，另外 32 条铁 皮石斛共 同形成单个 大的分支 ，未发现产地 来源与 系统树 的拓扑结构之 间 存在对应 关 系。结论 ：由于缺乏完善 的铁 皮石斛标 准品及其 DNA 参考序 列的提交标准 ，同时单个 ITS 序列仅 能提供有 限的 系统发 育信 息位 点，因此通过 ITS 序列分析 的方法推测铁 皮石斛样 品的产地来源 目前 尚不具有可行性 。 关键词：铁皮石斛 内转录间隔区 系统发 育分析 物种鉴定 doi: 10.3969/j.issn.1674-3849.2012.05.018 铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo） 低血糖等功效，可用于胃肠道疾病、白内障、关节 为兰科（Orchidaceae）石斛属多年生草本，民间称其 炎、血栓闭塞性脉管炎及慢性咽炎等疾病的治疗。 为“救命仙草”，列“中华九大仙草”之首。因其含有 铁皮石斛常以枫斗的形式作为药材使用，在加 多糖、生物碱、蛋白质、氨基酸及微量元素等多种活 工炮制的过程中药材的形状、成分均会发生变化， 性成分，具有增强机体免疫力、抗衰老、抗肿瘤、降 这使得以形态学为主的鉴定方法在实际应用中显 得捉襟见肘。随着铁皮石斛市场价值的提高，混伪 收稿 日期 ：2011-12-22 品不断增多，这对中药材物种鉴定技术的更新换代 修 回 日期 ：2012-01-18 ＊ 科学技 术部国家“ 十二五”科技 支撑计划项 目（2011BA101B02）：珍稀 中药材铁 皮石斛 GAP 基 地优化 升级及 开发利 用研究 ，负责人：赖 小 平 ；国家 自然科学基金项 目：特异性 DNA 探针和特征肽指纹 图谱技 术在 燕 窝质量评价 中的应 用 ，负责人：赖 小平 ；广 东省 自然 科学基金博士启动项 目（10451040701006101）：基于 DNA 条形码技术的蛇蜕 药材 来源物种鉴定研究 ，负责人：陈念 。 ＊＊ 通讯作者：赖小平，本刊编委 ，教授 ，博导，广州中医药大学中药学院院长兼新药开发研究 中心主任 ，东莞广州中医药大学中医药数理工程研究院院 长，主要研究方向：中药学