大豆翻译起始因子E干扰片段克隆及其RNAi载体构建.pdf

华 北 农 学 报 ·2 0 1 4 ，2 9 ( 4 ) : 1 -6 4E 大豆翻译起始因子 干扰片段克隆及 其ＲNAi 载体构建 ， ， ， ， ， ， 高 乐 翟 锐 丁雪妮 李 凯 章红运 王 涛 智海剑 ( ， ， ， 210095) 作物遗传与种质创新国家重点实验室 南京农业大学国家大豆改良中心 农业部大豆生物学与遗传育种重点实验室 江苏南京 : ＲNA (ＲNA interference ，ＲNAi) ， ， 摘要 应用基于 干扰 原理的大豆转基因技术 能够在转录水平沉默同源靶基因 这 。 VPg 10 eIF4E 为转基因抗病毒作物的培育提供了新的策略 通过比对已报道的能与病毒 发生互作的 种植物的 氨基 ， eIF4E 62 ～ 237 ， 406 bp eIF4Ei ( 58 bp 酸序列 确定出大豆 的保守区间为 位氨基酸序列 克隆出 的干扰片段 含 特异性 重组序列attB)， GATEWAY pB7GWIWG2 ( )-eIF4Ei 。 进而采用 技术构建了干扰表达载体 Ⅱ 之后通过测序证实干扰片 eIF4Ei ; 2 ccdB eIF4Ei ; 段 在载体构建过程中没有发生变异 酶切试验证实终端质粒的 个 位点均被 置换 用启动子和终 PCＲ ， 2 。 止子设计的引物对含有重组质粒的菌液进行 扩增 证实 个干扰片段以相反的方向插入到终端质粒中 从而证 ， ＲNAi 明反向重复的干扰表达载体构建成功 为应用基于 原理的大豆转基因技术培育对大豆花叶病毒具有抗性的大 豆新种质提供了基础材料。 : ;eIF4E ;ＲNA ;GATEWAY ; 关键词 大豆花叶病毒 基因 干扰 技术 载体构建 中图分类号:S565． 1 文献标识码:A 文章编号:1000 － 7091 (2014)04 － 0001 － 06 Cloning of Interference Fragment of Eukaryotic Translation Initiation Fact