实验三—细胞的活体染色.ppt

实验四 细胞活体染色技术;基本介绍 实验目的 概念 实验原理 实验用品 实验方法 注意事项 ; 活体染色是指一个获得自动物或植物的细胞活组织被染色。至于体外活体染色是指也获得动物或植物分离出来的一部分细胞活一部分组织被一种活体染色剂染色而不影响细胞活组织的生命。体内活体染色与体外活体染色的主要区别：体内活体染色是在有机体内部，因此，体内活体染色是在还原的环境中进行的，至于体外活体染色是在空气中，在氧化的环境中进行的。所以一种真正的活体染色剂就是在一种生物的活细胞的某种构造上面的染料，但对于细胞、对于组织和对于生命本身不发生任何有害的作用。;l、学习细胞活体染色的方法。 2、观察动、植物活细胞内线粒 体，液泡系的形态、数量与分布。; 活体染色是利用某些无毒或毒性较小的染色剂，在不影响细胞生命活动的情况下显示细胞的天然构造，更具真实性。活性染色又分为体内活体染色和体外活体染色。; 一般的生物材料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后，细胞膜被破坏，染料才能进入细胞内部。但是，有一些染料（称“活体染料”）却能进入活细胞，它们是一些无毒或毒性很小的染色剂，能使细胞中某些特定结构着色。活体染料基本上不影响或很少影响细胞的生命活动。 　　活体染料多为碱性染料，如中性红、次甲基蓝、台昐蓝、詹纳斯绿B(Janus green B)、亮焦油紫等，它们解离后带正电，其中有的染料与胞内某些结构有专一性接合。例如，中性红染液泡系，詹纳斯绿B染线粒体。;(一)材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。 (二)器械：显微镜、镊子、刀片、’剪刀、解剖针、表面皿、载玻片、盖玻片、吸管、收水纸等。;l、Ringer氏液 NaCl 0．90g KCl 0．42g CaCl2 0．25g 2、1／3000中性红溶液 先配制l％的中性红Ringer氏源液，因中性红难溶解，需稍加热，(30℃一40℃)使之溶解，过滤，将滤液装入棕色瓶中暗处保存，临用前取少许源液用Ringer氏液稀释成1／3000的中性红溶液。 3、1／5000詹纳斯绿B 先配制1％詹纳丝绿B溶Ringer氏溶液，方法同上。 4、台盼蓝染色液 将l克台盼蓝溶于100毫升生理盐水中 5、香柏油、二甲苯、蒸馏水等。; 实验方法： (一)液泡系的中性红活体染色 l、用双面刀片将黄豆芽根尖 (约l一2cm2) 处小心纵切断面，一定要薄且均匀。 2、在载玻片中央滴加中性红染料。使材料在其中染色5一10分钟。 3、吸去染料，滴加Ringer氏液一滴，盖片、镜检、注意液泡系染成什么颜色， 其形态、大小如何、分布位置。; (二)线料体的活体染色 l、用植物细胞观察线粒体的活体染色 (1)用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块(约lcm2)，放在载玻片上用1/5000詹纳斯 绿B染色约30分钟。 (2)吸出染液，滴加Ringer氏液，盖片、镜检，注意观察线粒体分布及所呈形 状。; (1)取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块，放入盛有Ringer氏液的表面皿中洗去血液。 (2)将肝组织洗净后吸去血液，加入1／5000詹纳斯绿B染液染色30分钟，注意不可将组织块完全淹没。 (3)染色后撕开组织块，这样溶液中就会有一些细胞或细胞群。 (4)用吸管吸取溶液，放在载玻片的Ringer氏液中。垫两根短头发，加盖玻片，即可镜检。 (5)用油镜观察活染色的线粒体标本，要不断地来回转动细调焦螺旋，使盖玻片上下慢慢移动。使材料总是得到氧气，线粒体的染色才显得非常清楚。; 3、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 （1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1／5000詹纳斯绿B溶液。 (2)用牙签取口腔上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10一15分钟(注意不能干燥)，盖上盖片，吸去多余的溶液，即可镜检。; （三）台盼蓝染色鏊别死活细胞。 抽取小鼠腹腔水细胞涂于洁净载玻片上，滴加l％台盼蓝1滴，盖上盖玻片于显微镜下观察。; 注意事项： 在对口腔上皮细胞进行染色时不可使染液干燥，可适当补加染液。 在对植物进行观察时一定要让材料尽量展开。 詹姆斯绿B溶液现用现配，以保持它的充分氧化能力。 实验中速度要快，以免组织细胞死亡。;1、在仔细观察的基础上，选择典型结构进行描绘，要求真实、准确（注意各部分结构的比例关系）。 2、用铅笔绘图，线条要明确清晰，图的深浅明暗一律以点的疏密来表示，点要圆而一致，不得涂暗影或进行其它美术加工。 3、各部结构名