高密度细胞培养过程中二氧化碳的生成及其抑制作用.pdf

第18 卷第5 期 高 校 化 学 工 程 学 报 No.5 Vol.18 2004 年10 月 Journal of Chemical Engineering of Chinese Universities Oct. 2004 文章编号 1003-9015(2004)05-0633-05 高密度Ralstonia eutropha 细胞培养过程中二氧化碳的生成及其抑制作用 1,2 1 2 尚龙安 , 范代娣 , Ho Nam Chang (1. 西北大学化工系 陕西 西安 710069; 2. 韩国科学技术院生命化学工程系 大田 305-701 韩国) 摘 要 测定了高密度R. eutropha 细胞培养过程中二氧化碳的生成量 当通气量维持在1.0vvm 时 出口气体中二 氧化碳的最大浓度高达 15% 为了了解高密度细胞培养过程中二氧化碳对细胞生长代谢可能产生的抑制作用 通过 施加不同浓度 不同持续时间的二氧化碳脉冲 模拟测试了 5 升发酵罐内二氧化碳对R. eutropha 细胞生长代谢的 抑制作用 实验发现 二氧化碳对细胞生长的抑制作用随着二氧化碳脉冲时间的增长和浓度的增高而增强 当在细 胞指数生长初期施加 小时浓度为 的二氧化碳脉冲 最终细胞浓度降低了 6 22% 31% 关键词 高密度细胞培养 二氧化碳抑制作用 二氧化碳生成 Ralstonia eutropha 中图分类号 TQ920.6 文献标识码 A 1 前 言 有关二氧化碳对细菌[1] [2] [3] 酵母菌 和霉菌 等微生物生长和代谢过程的影响已经有大量的研究报 道 起初的研究只是针对如何利用二氧化碳控制致病菌和食物腐烂菌的生长以便保护食品及水的质量 后来人们发现在发酵过程中 微生物自身代谢出的二氧化碳对发酵过程也有一定的影响[1,3,4] 实验表 明 发酵过程中黄青霉菌和黑霉菌的菌丝形态明显地受到二氧化碳浓度的影响[3,5~7] 二氧化碳对大肠 杆菌 啤酒酵母菌 假单胞菌等其它微生物生长和代谢的抑制程度随着二氧化碳的浓度和菌株的不同 而不同[8~13] 虽然已有大量的研究探讨了二氧化碳对微生物的作用机理[1,2] 提出了下列三个典型的抑 制作用机理模型 但是至今仍然没有得到一个明确的结论[3] 1) 二氧化碳对细胞膜的作用 一般认为二氧化碳和细胞膜内的脂质发生了化学反应 导致细胞膜 通透性能变化 降低了细胞从胞外摄取各种离子和营养的能力 2) 二氧化碳对胞内pH 的影响 胞外的二氧化碳浓度影响到胞内CO2(aq) 和HCO3- 的浓度 从而使 胞内pH 发生变化 而胞内许多酶的活性都与pH 有关 pH 的变化导致相关酶活性的降低使细胞生长 和代谢受阻 3) 二氧化碳对菌丝形态的影响 对于大多数丝状霉菌 其细胞生长和代谢活性与其菌丝形态有着 密切的关系 研究发现 较高浓度的二氧化碳可导致菌丝膨胀 菌体上的分支减少 从而影响到细胞 的生长和代谢 Ralstonia eutropha(真养产碱杆菌属) 因生长速度快 而且能在胞内累积大量的生物降解聚合物 聚羟基脂肪酸酯(PHAs) 已成为PHAs 的主要生产菌之一[14~16] 在实验室规模的高密度细胞培养中 R. eutropha 的细胞干重可达到每升200 克以上 随着细胞浓度的增高 细胞代谢出的二氧化碳增多 会导致培养液中溶解的二氧化碳浓度升高 同时随着发酵罐体积的增大 发酵罐内静压强的升高 也 会增大培养液中二氧化碳的浓度 因为二氧化碳的溶解度远远高于氧气 氮气等在发酵液中的溶解度 [3,4] 但是至今还没有有关二氧化碳对高密度发酵过程影响的报道 本文以R. eutropha 为高密度细胞培