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第五章　液相色谱－质谱联用 Liquid Chromatography-Mass Spectrometry 第一节 大气压离离子化技术 大气压下的离子化技术称为大气压离子化(atmospheric pressure ionization，API)，属于软离子化技术，是液相色谱一质谱联机系统中最常用的离子化技术。API适用的化合物范围广，灵敏度高，并可与多种接口技术(如流动注射、HPLC、HPCE)联机，它的出现极大地推动了有机质谱的发展。 大气压离子化包括大气压化学电离(atmospheric pressure chemcial ionization，APCI)和电喷雾电离(electrospray ionization，ESI)。 一、大气压离子化技术 （一）电喷雾离子化(ESI) 　　　电喷雾形成离子，即液滴表面电荷达到瑞利极限时发生库仑爆炸，形成带电小液滴；然后通过各种机制使分析物离子化，其离子化过程如下： (1)荷电液滴的产生 样品稀溶液通过喷针在同轴辅助气的作用下进入雾化室，在环电极和逆电极之间施加数千伏电压形成高静电场梯度，使溶液中的正或负电荷迅速聚集在液体的前沿形成突体，电荷的极性取决于施加高电场的方向。当电荷聚集使静电斥力超过溶液的内聚力时，突体脱离液滴表面雾化成μm粒径的带电液滴，并在电场作用下移向逆电极。 (2)气相离子的产生 在逆流加热气的作用下，已形成的带电液滴随溶剂蒸发而不断收缩，液滴表面电荷密度不断增大，当电荷之间的库仑斥力克服液滴表面张力时，液滴处于不稳定状态，发生库仑爆炸，形成更小的液滴；此过程不断重复，直至液滴表面达到瑞利极限，形成足够高的局部区域电场强度，形成气相离子，离子经逐级真空由大气压区进入质谱检测区。 ESI所形成的离子可能是带有若干个水分子或溶剂分子的水合离子或溶剂化离子，称为“簇”离子，也可能是与气相中其他分子形成的非共价键结合物。如果这些簇离子或弱键复合物在离子传输的过程中能够“存活”并到达质谱检测器，就可以观察到相应的水合离子、溶剂加合离子或弱键复合物离子等。 ESI最大的特点是可形成多电荷离子，能检测分子量达数十万Da(道尔顿)的化合物；ESI是极为温和的离子化方式，能在气相状态下研究溶液分子之间的非共价结合作用，甚至于分子的三维空间构型。 (二)大气压化学电离(APCI) APCI是大气压条件下的化学离子化，比较适于分析能气化、热稳定性好的化合物，多产生单电荷的分子离子或加合离子。其离子化机制有多种，包括经典APCI(classicalAPCI)、摩擦带电APCI(triboelectric APCI)和离子发射(ion ejection)等。 1．经典APCI 这一机制包括四个基本过程。 (1)流动相和待分析物在同轴辅助气的作用下雾化为小液滴。 (2)液滴在蒸发室中蒸发。 (3)电晕放电针产生电子，使气化后的流动相离子化。在APCI的方式下，流动相起着与CI源中试剂气(如甲烷气)相同的作用，流动相组成不同，形成的离子类型可能会不止一种，因此存在着多种离子化机制。 (4)流动相分子离子化后与待分析物发生离子交换反应，并使其离子化，常见的离子化包括质子加合、质子丢失、电荷交换、电子捕获等。 对于弱极性到中等极性化合物而言，这种经典意义的APCI是最主要的离子化机制。 2．摩擦带电APCI 当流动相和待分析物进入喷口时，被喷雾气“撕裂”成小雾滴，在这一过程中可能会导致气液界面上因摩擦而带电，并使分析物离子化，如图6-6所示。这种带电不取决于放电针产生的电子，即使在放电电压较低或不施加放电电压时也可能使样品离子化。当分析物为中等极性或非挥发性时，常因摩擦带电而使分析物离子化。 3．离子发射 这一机制在ESI离子化过程中比较常见，在APCI中也同样可能存在。如果某些化合物在到达APCI离子源时就以离子状态存在，当流动相和待分析物液滴进入蒸发室后，随液滴的不断蒸发和收缩，这些已经存在的分析物离子会聚集在液滴表面，可能形成离子发射而使待分析物离子化。当分析物为强极性或在溶液中已形成离子时，这种离子发射机制就比较常见。与ESI相似，可以通过添加合适的缓冲溶液来改变分析物的离子化效率。 二、APCI和ESI的比较 三、影响样品离子化的因素 ESI是一个复杂的离子解吸过程，其影响因素很多，涉及到溶液化学反应和气相化学反应等。除仪器接口设计、干燥气的温度和流速等系统因素之外，影响电喷雾离子化或离子蒸发的因素主要包括样品的性质(样品的pK、浓度、表面活性)，溶液的pH值，溶剂的性质(包括组成、极性、粘度、沸点、表面张力等)，基质的影响(包括电解质的种类、浓度以及其他不纯物的