柯柏反应与铁-酚试剂比色法.PPTVIP

含量测定 比色法 1. 四氮唑比色法 皮质激素类的C17位的α-醇酮基具有还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量地还原，还原后产物在可见光区有最大吸收。 该反应在一定条件下可定量完成，且生成的还原产物具有一定的稳定性，可用于甾体激素类药物的比色测定。 2. 异烟肼比色法 甾体激素C3上酮基及某些其它位置上的酮基与常用的羰基试剂如异烟肼、2，4-二硝基苯肼及氨基脲等发生缩合反应，可作为含量测定的依据。是目前广泛采用的一种。 3.柯柏反应与铁-酚试剂比色法 （1）柯柏（Kober）反应 该反应是指雌激素与硫酸-乙醇共热呈色，用水和稀硫酸稀释后重新加热发生颜色改变，并在515nm处有最大吸收的反应。 含量测定 （2） 铁-酚试剂比色法 用铁-酚试剂改进Kober反应有以下优点： ① 少量铁盐加入能加速黄色形成的速率和强度；加速黄色转变为红色，也能加强红色的稳定性 ② 酚的加入可消除反应产生的荧光，加速红色的形成。 含量测定 分离较能高，可排除有关物质等杂质的干扰。 色谱条件：反相色谱；固定相 为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相 为甲醇-水组成的混合溶剂；检测器为紫外检测器。 高效液相色谱法 甾体激素类药物分子结构中的Δ4-3-酮基、Δ1,4-3-酮基、苯环等结构，在紫外光区有特征吸收。 紫外分光光度法