蛙神经-肌肉标本的制备及刺激与肌肉收缩的关系—培训课件.pptVIP

蛙神经-肌肉标本的制备及刺激与肌肉收缩的关系 李涛 Tel666049 Email:litao@zjnu.cn 一、实验目的 1.观察给予不同强度刺激时骨骼肌的收缩情况，验证刺激强度与肌肉收缩的关系。2.观察剌激频率与收缩形式之间的关系，了解单收缩和强直收缩。 二、实验原理 坐骨神经是由多条神经纤维组成的神经干，神经干中各组成纤维的兴奋性有所不同。 刚刚引起肌肉收缩所需的刺激强度称为阈刺激强度。 随着刺激强度的增加，坐骨神经干中发生兴奋的纤维数目随之增多，肌肉收缩的幅度也随之增大。 当神经干中的全部纤维都发生兴奋时，所需的最低刺激强度称为最大刺激强度。 阈刺激强度至最大刺激强度之间的刺激称为阈上刺激强度。 超过最大强度的刺激，神经所支配肌肉的收缩幅度不再增强。 二、实验原理 肌肉组织对于一个阈上强度的刺激发生一次迅速的收缩反应，称为单收缩。 两个同等强度的阈上刺激，相继作用于神经肌肉标本，如果刺激间隔小于单收缩的时程，则出现两个收缩反应的重叠，称为收缩的总和。 强直收缩：不完全强直收缩；完全强直收缩 三、试剂与器材 蛙、计算机、MedLab生物信号处理系统、解剖针、手术剪、圆头手术镊、尖头手术镊、玻璃勾针、蛙板、肌槽、连接导线、张力换能器、刺激输出线、任氏液、棉花、棉线、烧杯。 神经—肌肉标本（自己制备） 在神经上施加电刺激 准确记录骨骼肌张力 借助Medlab 四、实验步骤 1.材料和方法 (Materials and methods ) 实验动物（laboratory animal) 蟾蜍（中华蟾蜍指名亚种，Zhuoshan Toad） 雄性蟾蜍皮肤光滑，前肢趾上有黑色婚垫，会鸣叫。雌性蟾蜍皮肤粗糙，无婚垫，不会鸣叫。 婚垫 雄蟾 雄蟾 雌蟾 1.破坏脑和脊髓 ！判断脑脊髓破坏成功的标准　四肢肌肉松软，呼吸消失。 图1-1 破坏蟾蜍脑脊髓的方法 2.剪除躯干上部及内脏 ！注意勿损伤脊柱两侧的坐骨神经。 图1-2 剪除躯干上部及内脏 3.剥皮 ！注意保护脊柱两侧的坐骨神经束，镊子不要夹住坐骨神经。 图1-3剥掉后肢皮肤 将标本放入盛有任氏液烧杯中，不能用自来水清洗标本 洗净手及用过的剪刀、镊子等全部手术器械。 任氏液由无机盐和蒸馏水配置而成，每升溶液含NaCl 6.5g、KCl 0.14g、CaCl2 0.12g,、NaHCO3 0.20g、NaH2PO4 0.01g。任氏液的理化特性与蛙的组织液近似。可用于蛙的组织、器官润湿和营养。 4.分离两腿 ！注意不可剪歪，以防坐骨神经损伤 图1-4分离坐骨神经 5.分离坐骨神经 ！玻璃针钝性分离 ！忌用金属器械触、夹神经，防止过度牵拉神经。 ！用任氏液保持神经湿润。 5.坐骨神经-腓肠肌标本 图1-5坐骨神经腓肠肌标本 6.仪器标本连接 将张力换能器固定在铁支架上，肌肉标本的股骨固定于支架下端，腓肠肌跟腱的结扎线连于张力换能器的受力片上，连线应松紧适宜，并与桌面垂直，张力换能器的输入端接Medlab系统的1通道插座。 把穿好线的坐骨神经轻轻提起，放在刺激电极上或将刺激电极与肌肉直接接触。 完整的标本应包括四部分：一段脊柱骨、坐骨神经、腓肠肌、一段股骨头。 肌肉收缩检测模式图 earth 刺激电极 记录电极 神经传导动作电位检测模式图 CH1 CH2 CH3 CH4 刺激 1 2 3 4 5 6 7 + - MedLab实验系统 标本盒 坐骨神经 张力换能器 不同刺激强度对骨骼肌收缩的影响 刺激器参数 模式 自动调幅 主周期 2s 波宽 2ms 初幅度 0V 增量 0.1-0.2V 末幅 1-2V 脉冲数 1 延时 1ms 采样参数 显示方式 记录仪 采样间隔 1ms X轴显示比例 50：1 通道 1 4 直流(DC)/交流（AC） DC DC 处理名称 张力 刺激标记 放大倍数 100-1000 50-100 Y轴比例 4：1 64：1 实验结果（一） 阈强度/V 阈上刺激强度/V 最大刺激强度/V 　 　 　 不同刺激频率对骨骼肌收缩的影响 刺激器参数 模式 自动调频 串长 2s 波宽 2ms 幅度 最大刺激强度 初频 1Hz 增量 5Hz 末频率 50Hz 串间隔 5s 采样参数 显示方式 记录仪 采样间隔 1ms X轴显示比例 50：1 通道 1 4 直流(DC)/交流（AC） DC DC 处理名称 张力 刺激标记 放大倍数 100-1000 50-100 Y轴比例 4：1 64：1 实验结果（二） 单收缩频率/Hz 不完全强直收缩频率/Hz 完全强直收缩频率/Hz 临界融合频率/Hz 　 　 　 动作电位