第二讲分子生物学实验室仪器操作简介资料.ppt

1）开盖：转动手轮，使锅盖离开密封圈，添加蒸馏水刚没至板上； 2）通电：打开控制面板上电源开关，若水位低则红灯亮； 3）堆放物品：需包扎的灭菌物品，体积不宜过大，各包装之间留有间隙，利于蒸汽穿透，提高灭菌效果； 3）密封高压锅：推横梁入立柱内，旋转手轮，压紧锅盖； 4）灭菌：121℃， 20min；如为液体，液体必须装在可耐高温的玻璃器皿中，不宜超过2/3； 5）灭菌结束，所有东西放入干燥箱干燥，排尽水气。 操作程序： 1）如是手动的灭菌锅，灭菌过程中，应注意排 净锅内冷空气，否则会影响灭菌效果。 2）灭菌结束后，要等温度降为“0”，才可打开灭 菌锅锅盖； 3）高压蒸汽灭菌时，须保持高温高压，因此必 须严格按照操作规程操作，否则易发生意外 事故。 注意事项： 思考题 试述实验室常用仪器的名称，用途及操作时的注意事项 分子生物学 2010 实验 第二讲 实验室常用仪器设备简介及操作 微量移液器 高速台式离心机 PCR仪 凝胶成像系统 电泳仪 恒温气浴摇床 超净工作台 灭菌锅 1. 微量移液器 微量移液器有数字可调式和固定式两种型号，是计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。√ 微量移液器有多种规格，在移液器量程范围内能连续调节读数。 √ √ √ √ 量液的操作步骤： 第一停点 第二停点 A 保持微量移液器垂直，将按钮压至第一停点； B 微量移液器头尖端浸入溶液，缓慢释放按钮； C 保持微量移液器垂直，将微量移液器头与容器壁接触，慢 慢压下按钮至第一停点； D 压至第二停点把溶液完全释放出； E 释放按钮回原状。 1． 未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。 2． 一定要在允许量程范围内设定容量，千万不要将读 数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。 3． 不要横放或倒拿带有残余液体吸嘴的移液器。 4． 不要用大量程的移液器移取小体积样品。 5. 移液器使用完后，将刻度调到最大刻度，收藏。 ?? 量液操作注意问题： 2. 台式高速离心机 离心机的分类 低速：每分钟几千转 高速：每分钟1 ~ 3万转 超速：每分钟3万转以上 低速：细胞等大分子 高速：DNA，蛋白等 超速:??病毒，蛋白，细胞器等 基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术 离心机的功能：分离 纯化 1、把离心机放置于平面桌或平面台上，检查离心机是否 放置平稳。 2、将离心管对称放入转子内，且要事先平衡。 3、锁紧门盖。 4、插上电源插座，按下电源开关。 5、设置转子号、转速、时间. 注意：对应的转子不可超速使用，否则对试管或转子有损坏。 6、当转子停转后，打开门盖取出离心管，关断电源开关。 台式高速离心机使用步骤 注意事项： 1、离心机在运转时，不得移动离心机，不要打开门盖。 2、安放离心机的台面应坚实平整，四只橡胶机脚都应与台面接触和均匀受力，以免产生振动。 3、离心管加液要平衡，若加液差异过大运转时会产生大的振动，此时应停机检查，使加液符合要求，离心试管必须对称放入。 4、若运转时有离心试管破裂，会引起较大振动应立即停机处理。 5、离心机彻底停止后，才可开盖，取样。 低温冷冻离心机 1.把离心机水平安放于地面 2.使用前开机预冷 3.对应转子重量要平衡 4.按操作规程操作 3. PCR仪 PCR仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域，如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医学等。 PCR仪，也称DNA热循环仪、基因扩增仪，能使一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧，从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段，它的每一循环包括DNA变性、复性、延伸三个反应。 操作程序: 1）开机：打开电源，显示主界面； 2）创建程序：使用”create”输入新程序（包括PCR循 环数，预变性、变性、复性、延伸的时间和温 度），保存程序（包括用户名和方法名）; 3）放入样品，盖上盖子; 4）在所建用户名下按“run”键，找到设定的程序， 按“start”键启动程序; 5）运行结束后按“stop”键停止运行，取出样品，关闭电源。 1、预变性：可用94～95℃，2～10min,一般用 5min。 2、变性：一般用94℃，30s~2min,一般45s~1min。 3、退火：温度自定，30s~2min。 4、延伸：72℃，对于(1kb=1min,每增加1kb加1min)。 5、循环数：一般25～35个循环(2,3,4步循环）。 6、最终延伸：72℃，5～15min。 7、保存：4℃，时间设为0-60min。