第五章：基因工程相关技术.pptVIP

第五章: 基因工程基本技术 主讲教师: 杨应斌 答疑电话: Email: yingbin@ 本章内容 核酸的琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 琼脂糖凝胶DNA片段的回收 感受态大肠杆菌的制备 琼脂糖凝胶电泳原理与操作 核酸的琼脂糖凝胶电泳—注意事项 准备干净的配胶板和电泳槽 选择电泳方法 １．一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以； 　２．如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳； 　３．用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。注意巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。 适合的电泳缓冲液 常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。 正确选择凝胶浓度 浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。 电泳的合适电压和温度 电泳时电压不应该超过20V/cm，电泳温度应该低于30℃。 注意如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象 DNA样品的纯度和状态 注意样品中含盐量太高和含杂质蛋白均可以产生条带