细菌一般染色方法.ppt

常用的细菌染色方法 革兰染色 抗酸染色 细菌基本形态结构观察 细菌染色意义 由于细菌个体微小，基本上无色透明，故将其用适当染料染色观察，方能显示它的形态、大小、构造及染色特性等，在细菌鉴别上有重要意义。 革兰染色是细菌学中使用最广泛的一种染色方法，籍此染色法，可将所有细菌区分为两大类。 细菌染色方法及原理 常采用美蓝，结晶紫等碱性染料进行染色。多数染料都是中性有机盐。据着色基的不同可分为以下类型： 碱性染料（basic dye）—带正电染料。其阳离子部分为发色基团，可与细胞中带负电的组分结合。 酸性染料（Acid dye）—带负电染料。其阴离子部分为发色基团，可与细胞中带正电的组分结合。 革兰染色原理 细菌的等电点较低，约在pH 2～5之间，故在中性、碱性或弱碱性溶液中，菌体蛋白质电离后带负电荷，易与带正电荷的碱性染料如龙胆紫及碱性复红等结合，使细菌被染成紫色或红色。 一、细菌染色标本片的制备 细菌染色检查，首先要进行细菌标本制备。制备细菌标本一般包括涂片、干燥、固定三步。 固定的目的和方法 使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得更牢固 可改变菌体对染料的通透性 加热固定可杀死细菌，比较安全 固定的方法将制成的标本匀速通过火焰三次 革兰染色 染色： 初染（结晶紫） 媒染 （碘液） 脱色（酒精） 复染（复红） 滤纸吸干 油镜镜检 染色步骤 结晶紫初染 　　　　　卢戈碘液媒染 　　　　　　　　　　　９５％乙醇脱色 　　　　　　　　　　　　　　　　　复红复染 滤纸吸干 油镜镜检 抗酸染色法(acid-fast stain) 分枝杆菌属的细菌（包括结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌等）为抗酸性细菌，一般染色法不易着色，须用抗酸染色法。 注意事项 涂片要略厚 加温染色或延长染色时间，加温时随时补加染色液 分枝杆菌呈红色(+) 其他细菌和背景为蓝色(-)。 操作过程 取痰液→ 涂片（略厚）→干燥→固定 → 石炭酸复红加温染色8~10分钟后→ 用3%的盐酸酒精脱色约1~2分钟， 脱色时轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止 水洗后，用碱性美蓝复染1分钟→水洗， 印干 → 镜检 细菌基本形态结构观察 基本形态 球菌 杆菌 弧菌 特殊结构 芽孢 枯草杆菌，破伤风梭菌 荚膜 肺炎球菌 鞭毛 变形杆菌 * * safranin Crystal violet （２） （３） （１） （４） １分钟水洗 １分钟水洗 ３０秒水洗 ３０秒水洗吸干 Germ is stained violet or red 结晶紫初染１分钟 　　　　水　洗 碘液媒染　１分钟 水　洗 酒精脱色　３０秒 水　洗 复红复染　３０秒 水　洗 形态： 细长，略弯曲的杆菌，多聚集成团。无鞭毛,芽胞。 染色性： 不易着色，抗酸染色阳性。菌体呈红色，背景中其他物质蓝色。 结核分枝杆菌(M.tuberculosis) 葡萄球菌 链球菌 肺炎球菌 脑膜炎球菌 革兰阳性 革兰阴性 肺炎（双）球菌 荚膜 *