第11单元 第43课时 生物技术在食品加工及其他方面的应用3.13.ppt

3．凝胶电泳法原理 凝胶电泳法的原理是不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速率不同。如下表： √ √ 分子大小 √ √ 分子形状 √ √ 电荷量 √ 电荷性质 决定运动速率 形成阻力 形成库仑力 决定运动方向 4.实验操作流程  样品的处理  粗分离——透析(去除小分子杂质)　  纯化——凝胶色谱法进行分离和纯化　 纯度鉴定——SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量 4．(2011·广东卷，5)以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是 (　　) A．洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂 B．猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少 C．血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测 D．在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢 对位训练 答案　D 解析 猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少，是提纯血红蛋白的理想材料。提纯血红蛋白分四步：红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析，其中洗涤红细胞时，要用生理盐水反复洗涤，既要将红细胞洗涤干净，又要不破坏红细胞，然后再用蒸馏水和甲苯使红细胞破裂，释放出血红蛋白。分离提纯血红蛋白时用凝胶色谱法，其原理是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质，相对分子质量大的蛋白质移动速率较快；血红蛋白的颜色可用于观察红色区带的移动情况，并据此判断分离效果。 排雷　(1)血红蛋白的提取和分离时红细胞分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速率过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。 (2)凝胶的装填标准是紧密、均匀。检测凝胶色谱柱的装填是否成功可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。 (3)G－75：“G”代表凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围，75表示凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5 g。 (4)装填完后,立即用洗脱液洗脱的目的是使凝胶装填紧密。 (5)实验过程中加入柠檬酸钠的目的是防止血液凝固；低速、短时离心防止白细胞沉淀；缓慢搅拌防止红细胞破裂释放出血红蛋白。 (6)检测血红蛋白的分离是否成功的方法：如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。 1．影响果汁产量的物质 纤维素和果胶是组成水果的重要物质，这两种物质的存在使制作果汁时存在两个问题：一是果肉的出汁率低，耗时长；二是榨取的果汁浑浊、黏度高，容易发生沉淀。 2．处理方法——酶解法 常用的酶及其作用特点如下： 考点138　 生物技术实践应用——影响果汁产量的物质及 处理方法 纤维素 纤维二糖 葡萄糖 蛋白质 C1酶、 CX酶、葡萄糖苷酶 纤维素酶 催化果胶分解成为可溶性半乳糖醛酸 蛋白质 多聚半乳糖醛酸 酶、果胶分解酶、果胶酯酶 果胶酶 作用 本质 组成 提醒 果胶酶和纤维素酶都是复合酶，并不特指某一种酶，而是一类酶的总称。 3.探究酶活性最适条件和用量的实验设计 （1）原理 ①果胶酶的活性受温度（或pH）的影响，处于最适温度（可pH）时活性最高。 ②果肉的出汁率、果法的澄清度与果胶酶的活性大小成正比。  （2）流程 各取一支，分9组分别放入30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃的恒温水浴中加热（或各取一支，分5组分别调节苹果泥和果胶酶的pH为5、6、7、8、9，置于同一恒温水浴中） 将果胶酶加入相同温度 （或pH）的苹果泥内 恒温保持10 min过滤果汁，用量筒测量果汁的量，并记录于设计好的表格 (3)注意事项 在苹果泥和果胶酶混合之前，一定要保证底物和酶达到所要求的温度或pH条件，以避免混合后条件的变