高二生物基因工程基本操作程序3.pptVIP

； / 办公室装修 yzq135uip * * * * * * * 终止子 原核细胞的基因结构 真核细胞的基因结构 利用PCR技术扩增目的基因 PCR的全称： 聚合酶链式反应 PCR的原理： DNA复制 选修1P58 2.DNA分子的复制需要哪些条件？ 1.DNA分子的复制的过程是怎样的？ 参与的组分 在DNA复制中的作用 解旋酶 打开DNA双链 DNA母链 提供DNA复制的模板 4种脱氧核苷酸 合成子链的原料 DNA聚合酶 催化合成DNA子链 引物 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 碱基 OH O O P O HO OH O O P O HO 碱基 OH OH 脱氧核糖 磷酸基团 碱基 脱氧核糖 碱基 碱基 脱氧核糖 5′ 3 ′ 多脱氧核苷酸链结构简图 O O P O HO 碱基 O OH O O P O HO OH 碱基 5′ 5 ′ 3′ 3′ 模板 原料 引物 　酶 控制温度 利用PCR技术扩增目的基因 ——目的基因DNA ——四种脱氧核苷酸 ——如单链DNA分子片段 ——耐热的DNA聚合酶 ——PCR仪自动调控 PCR的条件： PCR反应的过程 变性(90-95℃) 复性(55-60℃) 延伸(70-75℃) 1、基因表达载体的构建目的： a.使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。 b.使目的基因能够表达和发挥作用。 2、基因表达载体的组成 目的基因 启动子: 终止子: 标记基因等 一段有特殊结构的DNA片段。 位于基因的首端。 一段有特殊结构的DNA片段。 位于基因的尾端。 启动子的作用： 终止子作用： 使转录在所需要的地方停止。 标记基因作用： 是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基 因，从而将有目的基因的细胞筛选出来，如青霉素基因。 是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质。 1、什么是转化？ 2、目的基因导入植物细胞常用的方法是什么？具体过程是怎样的？ 3、目的基因导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？ 4、目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？ 转化 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 1.目的基因导入植物细胞 常用的方法: 农杆菌转化法、基因枪法、花粉 管通道法 农杆菌的特点: c.Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 b.具有趋化性。 a.易感染双子叶植物和祼子植物。 1.目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法的导入过程: 构建基因表达载体 转入 农杆菌 植物细胞 导入 稳定维持和表达 ２.目的基因导入动物细胞 常用的方法: 显微注射技术 操作程序： a.先提纯含目的基因的表达载体 b.从雌性动物体内取出卵（受精卵） c.显微注射仪进行显微注射 d.将含目的基因的受精卵移植到输卵管或子宫中发育成新个体 3.目的基因导入微生物细胞 原核生物的特点: 繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少。 大肠杆菌的转化过程: 用Ca2+处理细胞→ 感受态细胞→重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子。 增加细胞壁的透性，与细胞膜无关 1、导入目的基因后需要检测哪些方面？各采取什么方法？ 2、什么是DNA分子探针？检测时的DNA探针通过什么原理来检测目的基因和相应的mRNA？ 3、利用抗体－抗原杂交检测的原理是什么？ 1、导入目的基因后需要检测哪些方面？各采取什么方法？ 2、什么是DNA分子探针？检测时的DNA探针通过什么原理来检测目的基因和相应的mRNA？ 3、利用抗体－抗原杂交检测的原理是什么？ 1.目的基因是否插入受体细胞染色体的DNA上 目的基因的检测内容和方法 检测方法: DNA分子杂交技术 DNA探针： 用放射性同位素等作标记的含有目的基因的DNA片段。 2.目的基因是否转录出mRNA 目的基因的检测内容和方法 检测方法: 分子杂交技术 用DNA探针与mRNA杂交。 目的基因的检测内容和方法 检测方法: 抗原—抗体杂交 3.目的基因是否翻译出蛋白质 4、个体生物学水平的鉴定 β—珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分，当它的成分异常时，动物可能患某种疾病，如镰刀型细胞贫血症，假如让你用基因工程的方法使大肠杆菌生产出鼠的β—珠蛋白，想一想，应该如何设计？ 思考与探究 思考与探究 1.从小鼠中克隆出β—珠蛋白基因的编码序列（CDNA）。 2.将cDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。 3.将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠