花粉生活力测定(终).ppt

实验五 花粉发芽试验和生活力的测定 指导教师：姜喜2014.6.19 学习和掌握果树发芽试验和花粉生活力测定的技术。 花 粉 一、实验目的 果树杂交工作中，往往会遇到父母本花期不遇，必须采集花粉短暂贮藏，经贮藏的花粉及其生活力如何，必须经过测定，以保证杂交效果。 正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活力。 花粉生活力的高低直接影响植物授粉、受精乃至坐果。 二、实验原理 1、材料: 正在开花的植株花粉 2、器具: 盖玻片 载玻片 培养皿 滴管 镊子 解剖针 吸水纸 水浴锅 恒温箱 天平 烧杯 玻棒 电炉 普通显微镜 3、药品: 蒸馏水 硼酸 蔗糖 琼脂 联苯胺 α-奈酚 碳酸钠 过氧化氢 磷酸氢二钠 磷酸二氢钾 氯化三苯基四氮 三、实验材料与用具 配置培养基 （ 1%琼脂+0.01%硼酸+ 5%-20%蔗糖 ） 煮沸溶化 用玻棒分装与凹玻片中 播撒花粉 置于培养皿中20-25℃恒温培养数小时 保持湿度 镜检计数 四、实验方法与步骤 （一）花粉发芽试验 显微镜 隔一定时间检查一次 随机调查5个视野，若发现花粉已发芽时，就记录花粉粒总数和发芽数，算出平均值，将观察结果填入表内。 花粉发芽的标准：以花粉管伸长超出花粉直径为准。若花粉发芽率在5%以下，为极弱，不能采用。 花粉发芽率=发芽花粉总数/花粉总数*100 ★ 优点：能够统计出百分率，准确度高 ★ 缺点：操作相对复杂，而且花粉发芽条件与实际不完全相符易受培养基配方的影响导致结果的偏差。 【注意事项】 1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。 2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。 3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的植物花粉活力的测定。 4 h 密集 24 h 1 过氧化物酶法： 具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉有无活性。实验中甲液成分为联苯胺，α-萘酚、碳酸钠，乙液成分为过氧化氢。 H2O2 + 酚 醌 +H2O 过氧化氢酶 （无色） （红色、玫瑰红色） （二）花粉生活力的测定 将适量花粉置于载玻片上 先滴1滴甲液，再滴1滴乙液 充分反应 显微镜下镜检计数，红色的为有活力的花粉 ★优点：染色法用时短，见效快 ★优点：颜色判断易受个人因素影响，导致结果有较大差别。 【注意事项】 滴加甲液和乙液后，会产生大量的气泡，待气泡基本消失后方可观察。 统计生活力的方法同前。 TTC即2、3、5-三苯基四唑氯化物。主要原理在于检验花粉呼吸过程中脱氢酶的活性。2、3、5-氯化三苯基四氮唑(TTC)的氧化状是无色的，被氢还原时成红色的TTF。 有活力 2 TTC法： （1）取少量花粉放在载玻片上，并在花粉上滴上1~2滴配制液，用玻璃棒混合盖上盖玻片。 （2）将载玻片置于恒温箱中（35~40℃）约15~20分钟。 （3）在显微镜下观察：凡具有生活力的花粉呈红色，部分丧失生活力的呈淡红色，无色的是死的和不育的花粉粒。 （4）观察和测定结果：每片观察3个视野，并统计具有生活力的花粉的百分率。 以碘－碘化钾溶液（?0.3g?碘＋?1.3g?碘化钾溶于?100ml?蒸馏水）染色后于显微镜下观察。 有活力 无活力 3、碘－碘化钾法 1、将培养基法和染色法两种方法测得的结果列表记录，并计算花粉的生活力。 2、比较测定花粉生活力三种方法的优缺点。 3、绘制一花粉粒发芽形态图。 五、结果与分析 花粉发芽试验观察记载表 品种 培养基配方 视野1 视野2 视野3 花粉总数(个） 发芽数(个） 萌发率(%) 花粉总数(个） 发芽数(个） 萌发率(%) 花粉总数 (个） 发芽数(个） 萌发率(%) 1 2 3 4 5 花粉活力测定观察记载表 品种 染色方法 视野1 视野2 视野3 花粉总数(个） 染色数(个） 生活力(%) 花粉总数(个） 染色数(个） 生活力(%) 花粉总数 (个