禾谷缢管蚜热激蛋白Hsp90基因的克隆与表达分析.PDFVIP

植物保护学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，２０１７，４４（１）：１６－２３ ＤＯＩ：１０１３８０２／ ｊ．ｃｎｋｉ．ｚｗｂｈｘｂ．２０１７２０１５１８３ 禾谷缢管蚜热激蛋白Ｈｓｐ９０ 基因的克隆和表达分析 李玉婷　 赵　 奇　 房　 冰　 陈茂华∗ （西北农林科技大学植物保护学院，农业部西北黄土高原作物有害生物综合治理 重点实验室，陕西 杨凌７１２１００） 摘要：为探讨高温驯化对禾谷缢管蚜Ｒｈｏｐａｌｏｓｉｐｈｕｍｐａｄｉ Ｈｓｐ９０ 基因表达量的影响，以及其在不同 发育阶段的表达，通过ＲＴ⁃ＰＣＲ与ＲＡＣＥ技术克隆了热激蛋白Ｈｓｐ９０基因的全长，命名为ＲｐＨｓｐ９０， 采用生物信息方法分析了其序列特征，利用实时荧光定量ＰＣＲ技术研究了ＲｐＨｓｐ９０在禾谷缢管蚜 不同发育阶段和驯化后热激处理的表达量变化。 结果显示：禾谷缢管蚜ＲｐＨｓｐ９０ 的ｃＤＮＡ 全长为 ２ ６４４ ｂｐ，编码７２７ 个氨基酸，分子量为８３２ ｋＤ。 推导的氨基酸序列具有Ｈｓｐ９０ 蛋白家族的５ 个 签名序列及Ｃ末端细胞质特征序列ＥＥＶＤ。 系统进化树结果显示，ＲｐＨｓｐ９０ 与其它昆虫Ｈｓｐ９０ 具 有很高的相似性。 实时荧光定量ＰＣＲ结果表明，不同发育阶段ＲｐＨｓｐ９０ 均有表达，并且４ 龄若蚜 期表达量最高，显著高于其它龄期；２７℃热驯化后禾谷缢管蚜ＲｐＨｓｐ９０ 表达量和常温２４℃处理试 虫无显著差异；热激处理显著诱导ＲｐＨｓｐ９０ 的表达，３９℃热激处理ＲｐＨｓｐ９０表达量显著高于４０℃热 激处理；热驯化种群经热激处理后表达量显著高于常温热激处理。 表明ＲｐＨｓｐ９０ 在禾谷缢管蚜不 同龄期差异表达，且在该虫对热胁迫的响应中具有重要作用。 关键词：禾谷缢管蚜；Ｈｓｐ９０；基因克隆；表达分析 Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅＨｓｐ９０ ｇｅｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｂｉｒｄ ｃｈｅｒｒｙ⁃ｏａｔ ａｐｈｉｄ，Ｒｈｏｐａｌｏｓｉｐｈｕｍｐａｄｉ Ｌｉ Ｙｕｔｉｎｇ　 Ｚｈａｏ Ｑｉ　 Ｆａｎｇ Ｂｉｎｇ　 Ｃｈｅｎ Ｍａｏｈｕａ∗ （Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｃｒｏｐ Ｐｅｓｔ Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｐｅｓｔ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ Ｌｏｅｓｓ Ｐｌａｔｅａｕ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ； Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ａ＆Ｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ７１２１００，Ｓｈａａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｈｅａｔ ａｃｃｌｉｍａｔｉｏｎ ｏｎ ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ９０ ｉｎ Ｒｈｏｐａｌｏｓｉｐｈｕｍ ｐａｄｉ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅｓ， ｔｈｅ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ＰＣＲ （ＲＴ⁃ＰＣＲ） ａｎｄ ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ （ＲＡＣＥ） ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｍｐｌｉｆｙ ｔｈｅ ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ ｃＤＮＡ ｏｆ Ｒ． ｐａｄｉ Ｈｓｐ９０ ｇｅｎｅ （ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ ａｓ ＲｐＨｓｐ９０）． Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ＲｐＨｓｐ９０． Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ＲｐＨｓｐ９０ ｇｅｎｅ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅｓ ａｎｄ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈｅａｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ． Ｔｈｅ ｒｅｓ