重组人胰蛋白酶的稳定性研究.pdf

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2017-06-20 发布于天津
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重组人胰蛋白酶的稳定性研究

重组人胰蛋白酶的稳定性研究 1.重组人胰蛋白酶反复冻融的稳定性取重组人胰蛋白酶酶液，置于−20℃下反复冻融。按常规方法测定每次冻融后的酶活，以未冻融酶液的活力为100%，计算酶活残余率。图1.重组人胰蛋白酶反复冻融的稳定性 2.重组人胰蛋白酶酶液的稳定性蛋白浓度为10mg/ml 的重组人胰蛋白酶酶液，配制pH 3 HCl 溶液，50mM NaAc-HAc pH 3.0, pH 5.0 缓冲液，50mM Tris-HCl pH 7.6 缓冲液，一组不添加CaCl ， 2 另一组添加10mM CaCl 。每周测定各管酶活，以酶液的初始活力为100%，计算 2 酶活残余率。酶活残余率% 时间/days 7 14 28 35 保存条件 −20℃ 1mM HCl 无Ca2+ 84.7±3.9 43.8±1.0 34.0±1.0 34.6±0.2 10mM Ca2+ 11.1±0.0 0.0±0.0 0.0±0.0 0.0±0.0 −20℃ pH 3NaAc-HAc 无Ca2+ 0.0±0.0 0.0±0.0 0.0±0.0 0.0±0.0 10mM Ca2+ 14.6±1.0 2.3±0.1 2.7±0.0 1.8±0.1 −20℃ pH 5NaAc-HAc 无Ca2+ 116.7±0.0 113.2±2.9 103.5±1.0 111.0±2.0 10mM Ca2+ 118.1±2.9 118.8±2.9 130.6±2.0 133.3±0.0 −20℃ pH 7.6Tris-HCl 无Ca2+ 92.4±2.9 75.0±2.0 68.8±1.0 64.6±1.0 10mM Ca2+ 116.7±0.0 113.2±1.0 127.1±1.0 113.9±2.0 4℃ 1mM HCl 无Ca2+ 50.7±1.0 43.1±2.0 35.0±3.9 35.7±1.4 10mM Ca2+ 91.0±1.0 94.4±0.0 81.3±1.0 67.4±1.0 4℃ pH 3NaAc-HAc 无Ca2+ 96.5±1.0 96.5±2.9 92.4±1.0 93.8±1.0 10mM Ca2+ 98.6±0.0 97.2±2.0 90.3±0.0 94.4±2.0 4℃ pH 5NaAc-HAc 无Ca2+ 61.1±2.0 60.4±1.0 39.6±1.0 39.4±0.8 10mM Ca2+ 93.8±1.0 92.4±1.0 65.3±0.0 59.0±1.0 4℃ pH 7.6Tris-HCl 无Ca2+ 10.6±0.1 5.6±0.0 2.7±0.1 2.3±0.1 10mM Ca2+ 90.1±0.2 83.3±2.0 63.2±1.0 54.9±1.0 图重组人胰蛋白酶酶液的稳定性 2. 2