机能学实验---离体蛙心灌流.pptVIP

一、实验目的 1. 本实验的目的是学习离体蛙心的灌流方法。 2. 观察各种理化因素对对离体心脏活动的影响。 二、实验原理 心肌细胞的生理特性表现为：自动节律性、兴奋性、传导性和收缩性。 心肌细胞外离子浓度的变化和因体内生物活性物质（如激素）引起的细胞膜离子通透性的改变，对心肌细胞的生物电活动和生理特性必然会产生明显的影响。 四、实验步骤 一、离体蟾蜍心脏标本制备 1.破坏脑和脊髓 2.仰卧位固定蟾蜍，暴露心脏 3.蛙心插管 五、观察项目 1. 换成无钙任氏液灌注，冲洗（下同）2. 加入3%氯化钙溶液1～2滴3. 加入1%氯化钾溶液1～2滴4. 加入1:10000 肾上腺素溶液1～2滴5. 加入1:10000 乙酰胆碱溶液1～2滴6. 加入2.5% 碳酸氢钠溶液1～2滴7. 加入3% 乳酸溶液1～2滴 五、注意事项 1.蛙心插管内液面勿过高或过低，每次换液时，必须用任氏液冲洗3次。 2.每次加药，心搏曲线出现变化后立即将插管内液体吸出。 3.随时滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润。 4.换能器头端应向下倾斜以免液体进入换能器。 六、实验结果 如果任氏液中钾离子浓度明显增高，蛙心会处于什么状态？ 九、结论 离体心脏的活动受环境理化因素的影响。 Thank you! * * 离体蛙心灌流 P128 正常的蛙心能按静脉窦的节律性自动产生兴奋，心脏的自动节律性活动，需要有一个合适的理化环境。 蟾蜍心脏离体后，用任氏液灌流，在一定时间内仍能保持节律性兴奋和收缩活动。由于心脏的正常活动还有赖于内环境因素的相对稳定，改变灌流液的成分可引起心脏活动的改变。 三、实验对象 蟾蜍 （腹面） （背面） A B 蛙心插管在心室 收缩时插入心室 4.连接仪器记录蛙心搏动曲线 （一）描记正常心搏曲线 曲线幅度 —— 收缩的程度 曲线疏密 —— 心率 曲线基线 —— 舒张的程度 （二）观察离子、药物和酸碱的影响 7． 3%乳酸 6． 2.5%NaHCO3 5．Ach 4．Adr 3． 1%KCl 2． 2%CaCl2 1．无钙任氏液 收缩程度 心率 观察项目 3%乳酸 2.5%NaHCO3 Ach Adr 1%KCl 3%CaCl2 无钙任氏液 收缩幅度（收缩力） 心率 观察项目 ↓ ↓ ↑ ↑ （“钙僵”） (甚至停于舒张期) ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ ↑ ↑ ↑ ↑ 七、结果分析与讨论 1.无钙任氏液 无钙任氏液灌流 细胞外液Ca2+ ↓↓ 心肌细胞动作电位期间 Ca2+ 内流↓↓ 心肌细胞胞浆Ca2+ ↓↓ 心肌收缩力收缩 ↓↓ 细胞外液Ca2＋浓度升高 工作细胞动作电位期间Ca2＋内流增加 肌浆Ca2＋浓度增加 兴奋收缩耦联增强 心肌收缩力增强 2. 3%CaCl2 慢反应细胞4期自动除极化速度增加 自律性增加 心率增快 细胞外液K＋浓度升高 K＋抑制 Ca2＋内流 收缩力↓ Ca2＋内流↓ 兴奋收缩 耦联削弱 3. 1%KCl IK1通道通透性↑， K＋易于外流，对抗了If内流去极 自律性↓ 当细胞外显著高钾时，细胞膜内外钾浓度梯度减小，使得静息电位绝对值减小至－55mv，使得钠通道失活，从而使心肌细胞兴奋性丧失，心脏可停搏在舒张状态 （当细胞外轻度高钾时，膜内外K＋浓度梯度↓，静息电位↓， RP与TP的差↓，兴奋性↑） 心肌细胞膜β1受体结合 Adr 肌浆网对Ca2＋通透性↑ 动作电位期间 Ca2＋内流性↑ 收缩力↑ 细胞膜对Ca2＋ 通透性↑ 4期自动除极 化速度↑ 自律性↑ 心率↑ 4.肾上腺素（Adr） Ca2＋与肌钙蛋白亲和力↓，肌浆网摄钙速度↑ 舒张速度↑ 复极期肌浆Ca2＋浓度降低速度↑ 心肌细胞膜M受体结合 细胞膜对K＋ 通透性增加 自律性降低 心率减慢 细胞膜对Ca2＋通透性下降 动作电位期间Ca2＋内流减少 心肌收缩力降低 窦房结细胞4期K+外流增加、最大复极电位增大 ACh 抑制钙通道 5. 乙酰胆碱 （Ach） 碳酸氢钠 乳酸 7. 3%乳酸 H+与Ca2+竞争肌钙蛋白， Ca2+不能与肌钙蛋白结 合，心肌收缩力↓。 6. 2.5％NaHCO3 中和H+，Ca2+与肌钙蛋白结合，心肌收缩力恢复。