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创新课题实验报告 课题：啤酒原料麦芽中的赤霉素的研究 指导老师：李永仙 组员：孟昭文 李航 王润东 一．赤霉素性质研究现状 1.1 赤霉素的理化性质 赤霉素GA3（Gibberellic acid） 化学名：2，4a，7-三羟基-1-甲基-8-亚甲基-赤霉-3-烯-1，10羧酸-14内酯， 分子式：C19H22O6， 分子量：346.38 又称赤霉酸。其结构内含有3个环，一个内酯环，八个手性碳，羟基，三个双键和一个羧基。是真菌恶苗病菌所产生的刺激植物生长抗生素。 结构式如下： 赤霉素GA3工业品为白色结晶粉末，含量在85%以上，熔点233-235℃。由于赤霉素GA3官能团的特殊排列方式以及几个易变化部位的相互牵制，使得它在很温和的条件下就有发生重排列或异构化的可能。但是，它的结构在常温避光条件下是稳定和易保藏的。赤霉素GA3易溶于醇类（比如甲醇、乙醇）、丙酮、醋酸乙酯等、乙酸乙酯有机溶剂和pH6.2的磷酸缓冲液中。微溶于水、醚中，不溶于石油醚、苯、氯仿等溶剂中。在温度低的酸性条件下，比较稳定。遇碱中和失去生理效用。其溶液在pH3-4下最稳定。在中性或微碱性条件下，稳定性下降。高温能明显加速其分解，因此赤霉素GA3不能以水溶液形式在室温下长期保存。 1.2赤霉素GA3检测方法与残留限量 目前关于赤霉素研究最多的是机理与应用上，对赤霉素的安全性分析和检测方法国内外报道的不多。主要方法有绵联免疫检测法，高效液相色谱法、薄层层析法、分光光度测定法。美国、日本等国规定水果、蔬菜中赤霉素最高残留限量为0.2mg/kg，而我国还没有相关限量标准。 目前检测赤霉素含量方法有以下几种，而麦芽中赤霉素含量检测尚无先例： 黄少白（1）用碳二亚胺（EDC）法将赤霉素A（GA4）与卵清蛋白（OVA）连接，形成GA4-OVA复合物用于包板，利用GA4-ME与GA4-OVA对兔抗GA4-PAbs竞争结合反应，建立了GA1,3,4,7,间接酶联免疫检测法（ELISA0。其灵敏度、检测范围和最小检测样品量分别为45pg，0.2-200ng和50-500mg，样品的平均回收率为97%，批内和批间的变异系数分别为4.2%和4.8%。 吴硕如（2）GA4-BSA结合物诱导制得兔抗，采用放射免疫测定法检测赤霉素，与GA1，GA3,GA7有较高的交叉反应率，而与GA5、GA9与GA20的交叉反应率甚小，检测范围25-800pg/50ul之间。 李进（3）采用竞争ELISA检测赤霉酸，在1ug/ml to150ug/ml范围内有较好的线性关系，回归方式为:y=0.44+15.59,相关系数为0.99，与HPLC比较有较好的一致性。 湛社霞（4）建立固相萃取-高效液相色谱法测定水果中赤霉素的含量。水果样品经50%甲醇-水提取后，用HLB萃取，以甲醇+水（3+1）洗脱，洗脱液经C18柱分离、二极管阵列检测器检测，用高效液相色谱仪测定。赤霉素回归方程为I=13358.46*C+1.69，相关系数r0.9999，相对标准偏差5%，加标回收率可达90%以上，以信噪比为3时，赤霉素的最低检测出限为0.11ug/ml。 陈小鹏（5）采用高效液相色谱测定黄瓜瓜条中赤霉素，试材用液氮研磨以100%冷乙腈浸提，浸提液抽虑，氯仿去除色素，PVP去除酚类杂质，乙酸乙酯提取激素，最后过PT-C18柱上进行分离，紫外检测器在252nm波长下检测、鉴定，GA3的检测线为0.242ugFW，回收率为80.2%。 周艳明（6）建立水果中赤霉素残留量的高效液相色谱检测方法，样品采用80%的甲醇提取，经液液萃取净化，以紫外检测器检测。添加回收率为82.8%-100.6%，变异系数为3.2%-4.6%，最低检出限为0.017mg/kg。 张有林（7）用SymmetryC18色谱柱（4.6mm*150mm）,以乙腈和1.8%乙酸[V(CH3CN):V(1.8%CH3COOH)=1:1]为流动相，流速为0.5ml min-1,Waters 2487UV-检测器，在检测波长254NM，柱温25°C的条件下，同时分离并测定了银凤桃中的GA3，回收率分别达到100.1%，该方法测量灵敏度达0.047ng/ml，精密度RSD%0.1。 黄红林（8）建立了固相萃取-高效液相色谱（SPE-HPLC）法分析番茄中赤霉素GA3残留量的方法。线性范围为0.21-1.05*102mg/l，检出限为0.011mg/kg,加标回收率为88.45%-95.90%，其RSD为1.15%-6.56%。 王骏（9）建立用HPLC/MS测定猴桃中赤霉素的方法。用甲醇-氨水溶液提取式样中的赤霉素，经固相萃取净化，以反相液相色谱分离、质谱检测器测定。赤霉素的最低检测线均为4.0ug/kg,回收率92.5%-101.4%，相对标准偏差1.68%-3