应用流式细胞术测定药用植物黄芩基因组大小_副本.pdf

中国农学通报 2013,29(25): 130-135 Chinese Agricultural Science Bulletin 应用流式细胞术测定药用植物黄芩基因组大小 1 1 1,2 张琳琳 ，曹 博 ，白成科 1 2 （陕西师范大学生命科学学院，西安710062 ；西北濒危药材资源开发国家工程实验室，西安710062） 摘 要：为了探讨和优化应用流式细胞术(FCM)测定药用植物的基因组大小（或称C 值）的方法，分别以 新鲜、幼嫩和硅胶干燥的叶片为材料，采用Otto 和LB01 两种细胞核提取液，利用流式细胞术对黄芩C 值 进行测定。结果表明，选用豌豆为内标植物时，相比LB01 一步法，Otto 两步法在低温提取、离心和保存 条件下，碘化丙啶染色浓度为0.02 mg/mL ，得到的细胞核散点图相对集中，碎片较少，容易准确取门，CV 较小。不同提取材料表明，幼嫩叶片和新鲜叶片利用Otto 二步法均能得到高质量的细胞核悬液，细胞 核数量多且散点图集中，有利于取门和测定的C 值更准确。而干燥叶片提取的细胞核得到的散点图分 散，无法准确取门和测定C 值。最终，系统地优化了利用流式细胞术测定药用植物黄芩基因组大小的方 法，并首次成功测定黄芩1C 值为0.58 pg ，基因组大小约为562 Mbp 。这一研究结果，将为了解黄芩的基 因组值大小和利用流式细胞术测定其他药用植物C 值提供参考，并将为黄芩属药用植物资源的遗传评 价和保护利用等研究奠定基础。 关键词：黄芩；Otto ；LB01 ；流式细胞术；C 值 中图分类号：Q37 文献标志码：A 论文编号：2013-0561 The Detection of Genome Size of Medicinal Plant Scutellaria baicalensis Georgi by Flow Cytometry 1 1 1,2 Zhang Linlin , Cao Bo , Bai Chengke 1 ( CollegeofLifeSciences,ShaanxiNormalUniversity, Xi ’an 710062; 2NationalEngineeringLaboratoryforResourceDevelopingofEndangeredChinese CrudeDrugsinNorthwestofChina, Xi ’an 710062) Abstract: To discuss and optimize the methods of estimating nuclear DNA content of medicinal plants by flow cytometry (FCM), fresh leaves, younger leaves and dry leaves by silica were taken as samples and Otto ’s buffer and LB01 buffer were used to estimate the C-value of Scutellaria baicalensis Georgi by FCM. The results showed that better results were easily a