第六章、微生物的生长与控制.pptVIP

第一节 微生物的生长规律及其测定方法 第二节 微生物培养法概论 第三节 有害微生物的控制 第一节 微生物的生长规律及其测定方法 一、分批培养细菌的群体生长 1.分批培养：一次培养并收获，实验室常用。 2.细菌的生长曲线 分批培养细菌，时间为横坐标，菌数对数为纵坐标。反映整个培养期间菌数变化规律。 （1）延滞期 ① 特点 代谢活跃，变大，数量不增加。 ②影响因素 菌种,接种物菌龄,接种量,培养基成分差别。 ③实践指导意义 在发酵工业上尽量缩短 在食品工业上，在此期消毒或灭菌。 （2）对数期 ① 特点：代谢最旺盛，代时最短，菌体形态大小、生理特征较一致。 ②指导意义 良好研究与诱变材料。 增殖phage或接种的最适菌龄； 工业上，尽量延长该期→提高菌体密度。 食品工业上，使有害菌不能进入此期。 （3）稳定期 ①特点 数目最多；内含物，芽孢以及次生产物开始形成。 ②产生原因 营养受限（耗尽，失调）； 有害废物的积累（酸、醇、毒素等）→pH、氧化还原势等不合适。 ③应用意义 生产上，延长→提高产量（补料、调pH等）。 收获细胞及初级产物的最佳时期。 （4）衰亡期 负生长，芽孢释放，细胞死亡、自溶。 比其他各时期时间长。 注：稳定期后期或衰亡期→收获次生产物最佳时期。 二、丝状微生物的群体生长 孢子接种→液体培养基→培养。 以时间为横坐标，菌丝干重为纵坐标，绘曲线。 包括：停滞期；迅速生长期；衰退期。 三、同步生长和同步培养技术 1.同步生长：分裂步调一致。 2.同步生长技术：机械法+环境条件控制法。 （1）机械法 不同阶段细胞体积和质量或与材料接合能力不同。 ①离心法：葡聚糖密度梯度离心。 ②过滤法和硝酸纤维滤膜法。 （2）环境条件控制法 ① 温度：适宜和不适宜交替处理，如芽孢杆菌。 ② 培养基成分控制 营养不足和营养丰富交替培养； 含抗生素和完全培养基交替培养； ③ 光照和黑暗交替：用于光合细菌。 四、微生物纯培养生长的测定 （一）细胞数目检测 直接法（血球计数板、比例计数法） 间接法（活菌计数法、膜过滤法） （二）微生物生长量测定 直接法(干重法，堆体积法) 间接法（比浊法，碳、氮含量法） 1.血球计数板法 适用范围：如细菌、酵母菌、霉菌的孢子等，死亡+存活数目。 特点：快，准，可测酵母菌出芽率，或活细胞率。 2.涂片染色法 特点：可同时计数不同微生物个数。 方法： 将0.1ml菌液涂于1cm2面积上→选若干视野→用镜台测微尺计算视野面积→计数→套公式：  菌数（个/ml）=[视野中平均菌数×(涂布面积/视野面积)]×10×稀释倍数 4.干重法 菌体离心或过滤→烘干至恒重(干燥温度可采用105℃、100℃或80℃)→称重。 该法适合菌浓度较高的样品。 5.比浊法 用分光光度计，一定波长下，测定菌悬液的OD值，计算菌数。 五、连续培养 单批培养到对数期后期，以一定的速度流进新鲜培养基，同时以溢流方式流出培养液→培养物长时间处于对数生长期或稳定的生长速率。 1.连续培养器 （1）恒化器 恒速流进培养基，营养浓度恒定，生长速率恒定。 原理：某一种营养物为亚适量（如碳、氮源、生长因子等）→生长限制因子→菌始终低于最高生长速率。 特点：生长速率恒定，菌体均一、密度稳定，产量低于最高菌体产量。 应用范围：实验室科学研究。 （2）恒浊器 培养液混浊度恒定。 原理：调节新鲜培养基流入速度和培养物流出的速度使菌浓度不变。 2.单级和多级连续培养 单级：代谢产物和菌体相平行时使用； 多级：与上相反，如丙酮、丁醇。 丙酮丁醇梭菌：菌体生长期（37℃，产菌为主）；产物合成期（33℃，产丙酮、丁醇为主）。 两级培养：第一级罐37℃，pH4.3，稀释率0.125/h；第二级为33℃，pH4.3，稀释率0.04/h。 第二节 微生物培养法 一、实验室培养法 （一）固体培养 1.好氧菌：试管斜面、平板等。 2.厌氧菌 （1）高层琼脂柱：加还原剂,石蜡封口。 （2）Hungate滚管 ①厌氧菌计数：铜柱除氧→预还原培养基、稀释液制备→稀释样品→滚管→培养→计数。 ②预还原培养基和稀释液制备 煮沸驱氧→分装到螺口厌氧滚管（4.5-5ml培养基或稀释液9ml）→通N2排除O2。 含指示剂—刃天青，由蓝→红→无色（无氧状态）→盖丁烯胶塞及螺盖→灭菌。 滚管： 培养基融化并冷却（45-50℃）→加稀释样品0.1ml→平放滚管机上滚动（内有冰）→培养24-48h后→计数。 （3）厌氧培养皿 （4）厌氧罐技术 含钯催化剂和美蓝； 3次抽真空，2次灌氮，最后灌N2+CO2+H2，催化H2+O2,美蓝被还原成无色。 （5）厌氧手套箱 (二) 液体培养 1.好氧菌的培养 （1