CSF标本采集.ppt

Huashan Hospital Huashan Hospital 章强强简历 复旦大学附属华山医院皮肤科真菌研究室主任、硕士研究生导师、主任技师。中国菌物学会医学真菌学专业委员会委员、国际人与动物真菌病学会中国学组成员，中华医学会皮肤性病分会真菌学组委员，中国中西医结合学会皮肤科分会真菌学组副组长，教育部国家科技奖励评审专家。任《检验医学杂志》 《中国真菌病学杂志》《中国抗感染化疗杂志》《实用皮肤病学杂志》编委、中华皮肤科杂志及Mycopathologia审稿人。作为访问学者曾赴西德慕尼黑大学皮肤病医院及意大利都灵大学传染病研究所研修医学真菌。曾获上海市科技进步三等奖、上海市优秀职务发明二等奖、上海市医学科技进步三等奖及国家自然科技基金。著作“临床真菌学”任副主编，至今在国际、国内杂志以第一作者发表论文60余篇，其中SCI 11篇。 侵袭性真菌病标本采集标准之脑脊液 复旦大学附属华山医院章强强  脑脊液标本采集 标本采集前的准备：在有盖无菌试管外贴上标签：姓名、性别、年龄、科别、床号、住院号、检验项目及送检时间。 标本采集与采集量：无菌操作，局部皮肤消毒后作腰椎穿刺，抽取量为2－3ml，置无菌试管内，也可抽于血培养瓶内培养增菌培养。 脑脊液采集.mp4 脑脊液标本处理 15分钟内常温送检。若不能及时送检，则常温保存（不能冷藏）。 标本大于2ml，则2000g离心10分钟，取沉渣接种。 若标本量少于2ml，则将标本直接接种于培养基。 脑脊液标本处理 离心后取沉淀物作墨汁染色后镜检。 取1ml分别接种于沙堡弱琼脂斜面2管，分别置26±1?C及35±1?C孵育（部分新生隐球菌只能在25?C生长）。 脑脊液标本处理.mp4 脑脊液墨汁涂片：新生隐球菌 * Huashan Hospital * 新生隐球菌的标本检测 标本来源：CSF、血、组织、痰、脓、尿、粪。 2-3mlCSF离心后取沉淀物。 墨汁涂片：滴加少量优质墨汁与CSF混合后覆上盖玻片镜检，可见圆形厚壁孢子，外围有一透光的荚膜。孢子出芽或不出芽，孢内有反光的脂质颗粒。 KOH涂片：镜下只见圆形厚壁孢子，不见厚荚膜，但仍可见反光的脂质颗粒。 鉴别：淋巴细胞、脓细胞也可具荚膜，但边缘模糊不清，胞壁薄，无反光的脂质颗粒。 * Huashan Hospital * 新生隐球菌 CSF墨汁涂片鉴别 * Huashan Hospital * 脑脊液离心涂片及培养：无绿藻 CSF新生隐球菌的鉴定(1) SDA 25℃－37℃，2-5天乳白色粘液性半透明菌落形成，日久转成奶油及橘黄色 。 个别菌株只能在25－28℃生长，非致病的在37℃不生长（理论上）。 经抗真菌治疗的CSF培养3周才见新生隐球菌生长。 培养基中可加氯霉素，但不能加放线菌酮。 * Huashan Hospital * CSF新生隐球菌的鉴定(2) 孢子呈圆形或椭圆形，直径4－6μm，个别可达20μm。 菌体外围形成荚膜（具致病性，不被墨汁所染色）。 不形成菌丝及假菌丝，芽殖，不产生子囊孢子。 荚膜的主要成分荚膜多糖是确定血清型特异性的抗原基础，并与其毒力、致病性及其免疫性密切相关。 * Huashan Hospital * CSF新生隐球菌的鉴定(3) 能同化D-葡萄糖，D-半乳糖，D-甘露糖，蔗糖、麦芽糖； 不能同化乳糖，密二糖； 尿素酶（＋），硝酸盐（—）； 不发酵糖类； 具酚氧化酶，能作用于多巴、单酚或双酚化合物产生黑色素（melanin），在含上述底物的培养基上产生黑色反应。 * Huashan Hospital * 新生隐球菌的血清型分类（1) A/D/AD型：AIDS患者易感，从环境、土壤及鸽粪中 可分离出，我国大部分为此型。 B/C型：较罕见，分布在美国的热带及亚热带地区， 对抗真菌制剂不敏感，疗程长，预后差 RAPD:可将新生隐球菌的血清型分为三组条 带:A/D/BC型。 CGB培养基可区分上述二型，新生隐球菌纯分离株在CGB培养基25℃孵育5天，B/C型会使培养基变成深蓝色，而A/D型不变色。 * Huashan Hospital * 新生隐球菌的血清型分类（2） CGB（Canavanine-glycine-bromthymol blue)培养基配制： A液:甘氨酸10g,KHPO41g,VitC 50μl,刀豆氨酸硫酸盐30mg,蒸馏水100ml.校pH5.6，以孔径0.45 μ醋纤膜抽滤。 B液:0.4%溴麝香草酚蓝20ml,琼脂20g,蒸馏水880ml,121℃15分钟灭菌。 待冷至50℃时，加入A液充分混匀，分装于无菌试管置斜面，