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Ience 科普天地 对狗鱼不同组织同工酶的研究 张丽燕 (大连水产学院生命科学与技术学院，辽宁，大连 116023) 摘 要：本文采用聚丙烯酰胺垂直板电泳法研究了狗鱼肌肉、心脏、肝脏、脑和眼睛等5种组织的超氧化物 脱氢酶(SOD)、苹果酸脱氢酶(MDH)和乳酸脱氢酶(LDH)睁谱。试验结果表明：狗鱼不同组织的 SOD酶谱具有明显的组织特异性，每种组织的酶带4—7条不等；狗鱼不同组织的苹果酸脱氢酶共检测到4条 酶带；狗鱼不同组织的乳酸脱氢酶共检测到8条酶带。 关键词：狗鱼；不同组织；超氧化物脱氢酶(SOD)；苹果酸脱氢酶(MDH)；乳酸脱氢酶(LDH) 狗鱼 (Esox americanus~e]in)属鲑行目，狗鱼科，狗鱼属，即黑斑狗鱼。俗称：狗鱼、鸭鱼。体细长、 稍侧扁；口裂极宽大，约为头长的一半；齿发达；背鳍及臀鳍位很后并相对；体侧有斑。狗鱼在产区的天然产量 很大，肉质细嫩洁白实不亚于鲤、鲫或大麻哈鱼。 狗鱼是在北半球寒带到温带里广为分布的淡水鱼。狗鱼性情凶猛残忍，行动异常迅速、敏捷，每小时能游 8公里以上。狗鱼以鱼类为食，食量大，冬季仍继续强烈索食，尤以生殖后食欲更旺。通常在清晨或傍晚猎取食 物，其它时间则不再游动，而是静下来休息，并慢慢地消化所吞食的食物，狗鱼捕食时异常狡猾。 同工酶电泳技术作为一种实用的生化遗传学研究手段之一，业已广泛应用于鱼类的物种及杂种鉴定、物种间 亲缘关系比较及系统分类、基因连锁与基因作图、遗传育种、胚胎发育过程中的基因表达与调控方面的研究 1 。 本实验应用聚丙烯酰胺垂直板电泳法对狗鱼的肌肉、心脏、肝脏、脑和眼睛等5种组织的超氧化物脱氢酶 (SO D)、苹果酸脱氢酶 (MDH)和乳酸脱氢酶 (LDH)进行初步研究，探讨其同工酶的酶谱表现模式及遗传基础的亚 基组成，为狗鱼的组织特异性及生化遗传研究提供有价值的参考资料。 1材料与方法 1．1 实验样品的采集 本研究于2005年9月共采集了来自达赉湖渔场的天然野生狗鱼30尾，均为健康正常个体。体长25~30cm，体 重500~600g。 每尾鱼取样前先剪断鱼鳃动脉，放血，活体解剖，肌肉取背鳍后最丰满处的白肌1～2g，肝脏取1～2g，心 脏、眼球及脑取全部。用生理盐水在0℃条件下洗去组织污血，称重后放入已编号的冻存管，于液氮中保存。运 回实验室后，放在-40~C低温冰箱中保存备用。 1．2 样品制备 肌肉样取0．3g，以1：3的比例 (重量g：体积m1)~mA．o．3％的 NAD液，于匀浆机中匀浆2min，粉碎组织。 用吸管将匀浆后的样品移入冷冻离心管中，在冷冻离心机中以17000r／min 4C离,~,20min，最后将离心后的上清 液移入到另一个冷冻离心管中供电泳分析用。肝脏样取0．3g，以1：4的比例 (重量g：体积m1)加入0．3％的 NAD液，匀浆，1200Of／rain 4C离心两次，第一次离心后，去除上层的油膜，第二次离心，至上层溶液澄清为 止。其它组织样品的制备方法同肌肉样。将制好的样品按4：1比例与指示剂混合，之后放入4℃冰箱备用。 1．3 同工酶测定方法 《北京水产》200892期总第111期O9 Ience 科普天地 染色液及脱色液和固定液参照胡能书等0 ，以溴酚兰为指示剂。电泳采用的是垂直板聚丙烯酰胺凝胶 (PAGE)方法嘲。已染色的胶条用数码摄像机进行拍片，保存图片，然后用Photoshop7．0$J图象处理软件对其图 形进行分析。 1．4 结果记录 同工酶的缩写、基因座位和等位基因的命名基本参照Shaklee口 和Whimore 方法。以同工酶缩写名称的大写 代表酶蛋白，小写代表编码基因。控制同一种酶的不同基因座位按照从阳极到阴极的顺序依次标记为1、2、 m m m m S S